[发明专利]一种活体检测小型鱼类表皮细胞钾离子流的方法

权利要求书

1.一种活体检测小型鱼类表皮细胞钾离子流的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)样本的准备：将活鱼麻醉10～20min，放置于无菌培养皿中，用滤纸条固定鱼体，树脂块轻压滤纸条边缘注入测试缓冲液，浸泡10～30min，使鱼体表皮细胞钾离子交换达到平衡；

(2)制作传感器：传感器组成部分如表1所示，向玻璃微管末端灌入钾离子灌冲液至充满所述电极尖端1～2cm，再将所述电极前端吸入相应的钾离子交换剂；处理后的电极套入已氯化的电极线插座并放入校正液中矫正；

表1 传感器组成部分

(3)确定检测部位：将浸泡后的鱼体放置于新的测试缓冲液中，置于非损伤微测系统显微镜下，在显微镜下观察表皮边缘，寻找结构清晰完整的区域，在显示器上调至能看清鱼体表皮细胞，再放入传感器，使用机械手调整传感器距离鱼体表皮1μm，开始检测鱼体的钾离子通量；

(4)对检测结果进行处理和分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的测试缓冲液为：151mMol/L NaCl、0.25mMol/L CaCl₂、0.2mMol/L MgSO₄、0.5mMol/L KCl。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的灌冲液为180～200mM KCl；吸入液体离子交换剂的长度为200μm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，矫正后电极的能斯特方程计算理想值为钾离子:-32～-58mV。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述钾离子流的流速为-400～0pmol·cm^–2·s^–1。