[发明专利]一种倍氯米松的核酸适配体及其筛选方法与应用有效
| 申请号： | 202010391124.2 | 申请日： | 2020-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN111979247B | 公开（公告）日： | 2022-04-08 |
| 发明（设计）人： | 罗卓雅;樊洪利;刘亚雄;董嘉媚 | 申请（专利权）人： | 广东省药品检验所（广东省药品质量研究所;广东省口岸药品检验所） |
| 主分类号： | C12N15/115 | 分类号： | C12N15/115;C12N15/10;G01N33/74 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 胡辉 |
| 地址： | 510663 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 倍氯米松 核酸 适配体 及其 筛选 方法 应用 | ||
1.一种倍氯米松的核酸适配体，其特征在于，所述适配体序列如SEQ ID NO.1～12任一项所示。
2.权利要求1所述核酸适配体的筛选方法，包括以下步骤：
S1. 将ssDNA文库固定于磁珠表面，洗涤，得洗涤液；
S2. 磁珠分离：将倍氯米松加入磁珠复合物中，孵育，洗脱，得洗脱液；
S3. qPCR检测：将步骤S1中洗涤液与S2中洗脱液进行qPCR检测；
S4. ePCR扩大文库：将步骤S2中洗脱液的剩余部分进行ePCR，扩大文库；
S5. 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳制备下一轮的文库；
S6. 将富集的文库进行高通量测序；
S7. 对测序后序列进行二级结构预测，并检测适配体的亲和力与特异性，筛选出亲和力高特异性强的核酸适配体。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1中将ssDNA文库溶解后，加入接头序列，进行梯度变性，将磁珠与变性混合物孵育后洗涤，得洗涤液。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤S2中实施反筛选过程，以去除非特异性适配体。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S7中采用荧光光谱法检测适配体的亲和力与特异性。
6.权利要求1所述核酸适配体在制备倍氯米松传感器中的应用。
7.一种倍氯米松检测传感器，其特征在于，采用序列如SEQ ID NO.7～12所示的核酸适配体作为探针，检测时，核酸适配体与倍氯米松结合后，采用Qd作为信号放大检测倍氯米松的Kd值。
8.权利要求1所述的核酸适配体在检测倍氯米松中的应用。
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