[发明专利]一种脂肽类生物表面活性剂的制备方法

权利要求书

1.一种脂肽类生物表面活性剂的制备方法，所述的脂肽类生物表面活性剂是采用枯草芽孢杆菌菌株进行发酵培养得到脂肽类生物表面活性剂产品，所述的制备方法包括以下步骤：

（1）产脂肽枯草芽孢杆菌菌种的构建：获取枯草芽孢杆菌产脂肽的基因序列，进行PCR扩增，构建包含该基因的质粒，再导入宿主枯草芽孢杆菌细胞中，完成产脂肽枯草芽孢杆菌菌种的构建；

（2）初级发酵培养：将上述构建的枯草芽孢杆菌菌种接入摇瓶培养，摇瓶中每500ml培养基接入1环菌种，在一定条件下发酵，得到初级摇瓶菌种；

（3）次级发酵培养：将上述步骤制得的摇瓶菌种转接入装有培养基的发酵罐中，摇瓶菌种与培养基的体积比为1:20，在一定条件下发酵培养，得到次级发酵菌种；

（4）分离提纯：将上述步骤中得到的发酵液经离心去除菌体，上清液加入等体积的氯仿/甲醇(1~2/1~3,V/V)，萃取，取萃取液的下层液，50~70℃减压蒸干得生物表面活性剂粗品，氯仿再次洗涤50~70℃蒸干得较纯的脂肽生物表面活性剂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，按照重量比计，所述步骤（2）中所述摇瓶培养基的配方是：米糠油3～4%、NH₄NO 0.4～1.5%、葡萄糖20～30%、NaCl 0.05～1.0%、KH₂PO₄0.05～1.0%、K₂HPO₄ 0.05～1.0%、酵母膏0.005～0.1%、复合微量元素0.005～0.01%，余量为水，pH为6.0~7.5。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其中，所述复合微量元素主要由氧化锌1.0g/L、氧化锡1.5g/L、硫酸锰1.2g/L、氯化铜1.1g/L、氧化钴0.9g/L及水复配而成。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤（2）中所述发酵条件为：温度40~50℃，pH 7.0~7.5，搅拌速度为120r/min，发酵时间为72~96h。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤（3）中所述发酵条件为：温度40~50℃，pH 7.0~7.5，搅拌速度为90r/min，发酵时间为10~12h。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤（3）中所述发酵罐的培养基配方包括：碳源、氮源、无机盐及营养元素。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其中，所述碳源选自葡萄糖、乳糖、蔗糖、淀粉、麦芽糖、大豆糖蜜、甘油、蔗糖糖蜜中的一种或多种的混合。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其中，所述氮源选自豆饼粉、蛋白胨、牛肉粉、玉米浆、酵母粉、硝酸铵、硫酸铵、尿素中的一种或多种的混合。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其中，所述无机盐及营养元素选自K₂HPO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄、FeSO₄、CaCO₃、CaCl₂、KCl、NaCl中的一种或多种的混合。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤（4）中离心条件为；转速8000~10000r/min，时间10~20min。