[发明专利]一种微拟球藻遗传转化体系及合成甘油三酯的基因和应用

权利要求书

1.一种合成甘油三酯(TAG)的基因，其特征在于：

1)具有SEQ ID NO 1所示的碱基序列；

或，

2)与序列表中序列1所限定的核酸序列具有95％以上同源性、且编码相同生物学功能蛋白质的DNA序列。

2.一种权利要求1所述基因所编码的蛋白，其特征在于：所述基因所编码的蛋白为具有下列情况之一的氨基酸序列：

1)具有SEQ ID NO 3所示的氨基酸序列；

2)通过将SEQ ID NO 3的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加而产生的衍生蛋白质的氨基酸序列，该衍生蛋白质与SEQ ID NO 3的蛋白具有相同的生物学功能。

3.一种构建权利要求1所述基因的方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)从微拟球藻的cDNA中扩增DGAT基因；

2)回收扩增产物连接到测序载体上，通过测序获得微拟球藻DGAT基因的全长编码序列，即SEQ ID NO1所示的碱基序列。

4.一种权利要求1所述基因的应用，其特征在于：所述合成甘油三酯(TAG)的基因在调控生物体内TAG含量中的应用。

5.一种构建权利要求1所述的具有甘油三酯(TAG)合成功能的基因的引物，其特征在于：引物为1)和2)：

1)NoDGAT2B-for：

5’GGTACCACATAATGACGCAGGTC 3’；

2)NoDGAT2B-rev：

5’GAATTCTCACTTAATAAGCAGCTTCTTG 3’。

6.一种通用的微拟球藻遗传转化表达载体，其特征在于：

1)含SEQ ID NO2所示的碱基序列；

或，

2)含与序列表中序列2所限定的核酸序列具有90％以上同源性、且具有相同功能的DNA序列。

7.一种权利要求6所述通用的微拟球藻遗传转化表达载体的应用，其特征在于：所述表达载体在改造微拟球藻基因组序列及遗传表型中的应用。

8.按权利要求7所述的表达载体的应用，其特征在于：将对数生长期的微拟球藻藻液、通用表达载体和鲑鱼精DNA混匀于f/2液体培养基，然后于25℃，100rpm条件下避光复苏48h；复苏后离心收集藻体沉淀，将其与玉米淀粉悬液混匀，混匀后于含zeocin和NaHCO₃的f/2琼脂糖平板上，25℃避光培养3天后，再以25℃，80μmol m^-2s^-1光照培养直至克隆长出，使微拟球藻高效、稳定的转化。

9.一种重组载体，其特征在于：重组载体含有权利要求1和6所述的DNA序列。

10.一种重组载体高效、稳定的转化方法，其特征在于：

将对数生长期的微拟球藻藻液、重组载体和鲑鱼精DNA混匀于f/2液体培养基，然后于25℃，100rpm条件下避光复苏48h；复苏后离心收集藻体沉淀，将其与玉米淀粉悬液混匀，混匀后于含zeocin和NaHCO₃的f/2琼脂糖平板上，25℃避光培养3天后，再以25℃，80μmol m^-2s^-1光照培养直至克隆长出，使微拟球藻高效、稳定的转化。