[发明专利]一种融合有NT3的丝素蛋白神经移植物的制备方法

权利要求书

1.一种融合有NT3的丝素蛋白神经移植物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

合成包含有丝素蛋白轻链以及NT-3的基因片段，连接至pET-30表达载体，将得到的重组表达载体转入BL21大肠杆菌，得到融合蛋白；

所述融合蛋白的序列如下所示：

MHHHHHHAPSVTINQYSDNEIPRDIDDGKASSVISRAWDYVDDTDKSIAILNVQEILKDMASQGDYASQASAVAQTAGIIAHLSAGIPGDACAAANVINSYTDGVRSGNFAGFRQSLGPFFGHVGQNLNLINQLVINPGQLRYSVGPALGCAGGGRIYDFEAAWDAILASSDSSFLNEEYCIVKRLYNSRNSQSNNIAAYITAHLLPPVAQVFHQSAGSITDLLRGVGNGNDATGLVANAQRYIAQAASQVHVYAEHKSHRGEYSVCDSESLWVTDKSSAIDIRGHQVTVLGEIKTGNSPVKQYFYETRCKEARPVKNGCRGIDDKHWNSQCKTSQTYVRALTSENNKLVGWRWIRIDTSCVCALSRKIGRTGGGGSGGGGSYAEHKSHRGEYSVCDSESLWVTDKSSAIDIRGHQVTVLGEIKTGNSPVKQYFYETRCKEARPVKNGCRGIDDKHWNSQCKTSQTYVRA LTSENNKLVGWRWIRIDTSCVCALSRKIGRT；

将融合蛋白以及丝素蛋白溶液混合，得到混合蛋白溶液，将丝素纤维网置于模具中，将混合蛋白溶液倒入模具中冷冻干燥，形成神经导管；变形处理后最终获得具有NT-3活性的丝素蛋白神经移植物。

2.根据权利要求1所述的融合有NT3的丝素蛋白神经移植物的制备方法，其特征在于，所述丝素纤维网由丝素纤维用编织机编织而成。

3.根据权利要求1所述的融合有NT3的丝素蛋白神经移植物的制备方法，其特征在于，所述丝素蛋白溶液的制备方法为：将丝素纤维放入硫氰酸锂溶液中进行溶解，溶解后的溶液装入透析袋，以三蒸水为透析液透析60~80小时，得到丝素蛋白溶液。

4.根据权利要求2或3所述的融合有NT3的丝素蛋白神经移植物的制备方法，其特征在于，所述丝素纤维的制备方法为：将桑蚕丝置于碳酸钠溶液中煮沸不少于20分钟，取出后用三蒸水充分洗涤，重复此步骤2~4次，得到脱去外部丝胶的丝素纤维。

5.根据权利要求1所述的融合有NT3的丝素蛋白神经移植物的制备方法，其特征在于，混合蛋白溶液的浓度为5%-40%；融合蛋白与丝素蛋白的质量比例为1:99~50:50。

6.根据权利要求1所述的融合有NT3的丝素蛋白神经移植物的制备方法，其特征在于，变形处理为浸泡在60%乙醇中处理10~14h。

7.根据权利要求3所述的融合有NT3的丝素蛋白神经移植物的制备方法，其特征在于，透析袋的截留分子量为12~16kDa。

8.根据权利要求1所述的融合有NT3的丝素蛋白神经移植物的制备方法，其特征在于，冷冻干燥的温度为-70℃。

9.根据权利要求3所述的融合有NT3的丝素蛋白神经移植物的制备方法，其特征在于，硫氰酸锂溶液的浓度为9mol/L。

10.一种融合有NT3的丝素蛋白神经移植物，其特征在于，由权利要求1~9任一项所述的制备方法制备而成。