[发明专利]一种辣木花粉的超低温保存方法

说明书

本发明公开了一种辣木花粉的超低温保存方法，包括以下步骤：(1)选择上午9点至11点，采集有花粉的花朵；(2)将步骤(1)的花朵放在密封袋中，干燥，密封，预冻后，再置于(‑80)℃‑(‑200)℃中保存，备用；(3)将步骤(2)中得到的花朵解冻，得到所述的辣木花粉。本发明中的超低温保存方法可以将完整的辣木花朵保存起来，并且可将花粉活力的保持时间由正常的1‑2天延长至2‑3个月，延长了花粉的寿命；本发明中的解冻方式可以避免在化冻过程中产生细胞内的次生结冰，并且防止在化冻过程中水的渗透冲击对细胞膜体系的破坏，从而有效的保证花粉超低温冻存的效果。

技术领域

本发明涉及植物花粉的保存技术领域，更具体的说是涉及一种辣木花粉的超低温保存方法。

背景技术

辣木起源于印度和非洲的干旱或半干旱地区，凭借超强的生态适应力、丰富的营养价值、独特的生物活性，成为一种极具开发潜力的树种。辣木籽油是高级烹调油、化妆品、香料和防腐剂的优良原料。辣木籽油还可被用于航天、精密机械的润滑剂。另外，辣木种仁中富含有活性凝结成分，有净水效果，因此辣木又被誉为“植物黄金”。

花粉是植物种质的形式之一，包含该物种的所有基因类型，遗传信息极其丰富，是种质保存、交换、人工辅助授粉以及杂交育种的重要材料。辣木每朵花的花药中的花粉粘合成两个花粉团，花粉团粘性很大，很难均匀的散开，授粉成功需要依靠大量的昆虫传粉。此外，辣木开花量大，生理落花落果严重，在自然状态下，辣木花粉的寿命只有1-2天，这给提高辣木产量以及杂交育种工作带来极大的不便。开展花粉的中长期保存就显得尤为重要。在辣木盛花期大量收集辣木花，减少辣木花自然脱落，造成的浪费，并将辣木花粉低温冷冻保存，用于人工授粉，提高辣木产量，同时解决了杂交育种工作中效率低和花期不遇的问题。

超低温保存被誉为是种质资源长期保存最有效的方法，可以保存茎尖、愈伤组织、休眠芽、花粉、细胞、原生质体等。在超低温状态下，材料新陈代谢几乎完全停止，只要方法合适，液氮充足，理论上可以无限期保存材料。目前多个本木植物如袖子、油棕、柳树、山茶、桂花等都成功开展了花粉的超低温保存研究。研究表明不同植物花粉其超低温保存所采用的方法以及保存参数会因植物自身特性不同而不同。

目前尚未见到怎样采用超低温技术来保存辣木花粉、使辣木的花粉活力保持时间延长至大约2-3个月的技术报道，因此，提供一种针对延长辣木花粉寿命的超低温保存方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种能够延长辣木花粉寿命并维持辣木种质资源的遗传多样性的超低温保存方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案一种辣木花粉的超低温保存方法，包括如下步骤：

(1)选择上午9点至11点，采集有花粉的花朵；

(2)将步骤(1)的花朵置于密封袋中，经干燥，密封，预冻后，再置于(-80)℃-(-200)℃下保存，得到辣木花粉。

本发明的有益效果：

花粉超低温保存成功的关键，在于降温冷冻过程中避免细胞内结冰,造成细胞结构不可逆性的破坏，导致花粉死亡。在本发明中辣木花朵经过特殊的干燥脱水、预冻处理可以使细胞发生适当程度的保护性脱水,使细胞内的水流到细胞外结冰，并且在化冻过程防止细胞内次生结冰并且防止在化冻过程中水的渗透冲击对细胞膜体系的破坏。采用本方法冻存后可以有效延长花粉活力，并且保持花粉活力超越鲜花活力(冻存2-3个月后花粉活力依然可以达到90％以上)；有效解决了辣木花粉采集和保存的难题，在辣木盛花期大量收集辣木花，减少辣木花自然脱落造成的浪费，并将辣木花粉超低温保存后，可用于人工授粉，提高辣木产量，同时解决了杂交育种工作中效率低和花期不遇的问题。

优选地，步骤(2)中，所述干燥温度为30℃-40℃，干燥时间为1-9h。

更加优选地，干燥温度为35℃，干燥时间为4h。