[发明专利]检测抗双链DNA抗体的试剂盒、组合物及用途

说明书

本发明涉及用于检测抗双链DNA抗体的试剂盒，其包括包被有第二组分的固相支持物；和标记有吖啶类化学发光物质的第一组分，其特征在于，所述试剂盒进一步包括吖啶类非化学发光物质，其中，在碱性条件下，所述吖啶类非化学发光物质的9号位不能与过氧化物形成四元环。该试剂盒能够改善抗双链DNA抗体检测结果的相对变异系数。本发明还涉及相应的组合物及用于检测抗双链DNA抗体的用途。

技术领域

本发明涉及抗双链DNA抗体的检测，尤其涉及基于化学发光的双链DNA抗体的检测。

背景技术

抗双链DNA抗体是识别天然的双链DNA的抗体。一方面，抗双链DNA抗体可用作系统性红斑狼疮(SLE)高度特异性抗体，其在活动期SLE中阳性率较高，而在非活动期SLE中阳性率较低。但需注意，抗双链DNA抗体检测阴性时并不一定可以排除SLE，需结合其他指标进行综合评估。另一方面，据报道双链DNA抗体也与干燥综合征、药物性狼疮、混合性结缔组织病、肾脏损害、血管炎等有一定关联。抗双链DNA抗体的检测结果应结合临床分析，必要时应动态观察。

目前，抗双链DNA抗体检测方法包括间接免疫荧光法、印迹法、酶联免疫吸附法、化学发光免疫分析法等。间接免疫荧光法、印迹法、酶联免疫吸附法存在操作繁琐、耗时长的缺点，且对操作者有一定的专业技能要求。化学发光免疫分析法可配合全自动分析仪，具有操作简便、高通量的特性，正在越来越得到广泛使用。根据标记物的不同，化学发光免疫分析法通常分为酶促化学发光和直接化学发光，后者通常采用吖啶类化学发光物质作为标记物。

吖啶类标记物是一类量子产率非常高的化学发光试剂，其具有无须催化剂即可发光、灵敏度高、线性范围范宽等优势。吖啶类标记物的分子结构至少由两部分组成：发光基团(emitter)和离去基团(leaving group))，它们的结构中都有共同的吖啶环。吖啶类化学发光反应机理的研究已经比较成熟，常规的反应机理是在碱性条件下，过氧化氢与吖啶类标记物的9位碳原子发生加成，加成产物在碱性条件下形成的过氧负离子再亲核进攻羰基碳，离去基团离去并进一步形成不稳定的四元环中间体，开环后形成激发态的吖啶酮，其返回到基态的过程中释放出光子。

尽管如此，在基于直接化学发光法对抗双链DNA抗体进行免疫检测的情况下，由于反应体系中存在双链DNA，而吖啶类化学发光标记物具有三元芳香环的平面结构，可通过π-π共轭作用插入到双链DNA的双螺旋结构之间。在检测过程中，吖啶类化学发光标记物可能出现不可控地与反应体系中的(如固相载体上的)双链DNA嵌合，从而影响后续发光过程。由于该结合过程随机且不可控，导致对整个反应过程的影响没有规律性，最终表现为CV值偏大，即检测结果精密度低。

由于吖啶类化学发光试剂检测双链DNA抗体时存在精密度低的缺点，通常，在抗双链DNA抗体的体外检测研发过程中会避免使用这一方法，转而采用其他发光物质如鲁米诺等，或采用其他检测技术如，酶联免疫吸附法、酶促化学发光法等。但如此一来，吖啶类化学发光法的发光效率高、操作简便、灵敏度高和线性范围宽等优势就无法得以利用。

因此，在抗双链DNA抗体检测领域，存在着提高吖啶类化学发光法的检测精密度的强烈需求。

发明内容

在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。

如前所述，基于吖啶类化学发光标记物的直接化学发光法是一种高效、简便的分析方法，但当其应用于抗双链DNA抗体检测的情形下，却存在发光标记物与反应体系中的双链DNA不可控地嵌合的问题，由此导致检测精密度较低，难以符合体外检测试剂的要求。

有鉴于此，在第一方面，本发明提供了一种用于检测抗双链DNA抗体的组合物，包括：

标记有吖啶类化学发光物质的第一组分；和

吖啶类非化学发光物质。