[发明专利]一种硫丹人工抗原在酶联免疫试剂盒中的应用

说明书

本发明提供了一种检测硫丹的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、硫丹标准品溶液、硫丹抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液，所述包被原为硫丹偶联抗原，所述酶结合物为酶标记的硫丹抗体，所述硫丹抗体是由免疫原免疫动物得到的。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测硫丹的方法，它包括：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测蔬菜和水果样本中硫丹的含量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。

技术领域

本发明涉及一种硫丹人工抗原在酶联免疫试剂盒中的应用技术，具体涉及一种硫丹人工抗原分子结构以及用于检测硫丹的酶联免疫试剂盒，可定性、定量检测蔬菜和水果中硫丹药物的残留量。

背景技术

硫丹是一种人工合成的有机氯化合物，广泛用作农药杀虫剂。由于该药物具有杀虫范围广，价格低廉，对蜜蜂低毒等优点，被广泛应用于多种农作物。我国于上世纪90年代开始生产硫丹，到2011年，登记使用的硫丹产品有47种，涉及药企43家，称为该药物的第二大生产国。该药物有效期长，具有生物富集作用，对鱼类、贝类等有较大危害性，对哺乳动物具有累积毒性。已有大量文献报道在蔬菜、水果等农作物中检测到硫丹残留。

目前，全球有70多个国家禁止生产和使用硫丹。根据我国农业部等五部委联合发布的1586号公告，撤销硫丹在苹果树和茶树的登记。这就意味着硫丹不得继续在已撤销的作物上使用，并将逐步淘汰硫丹的生产和使用。

硫丹国内外的研究方法多采用固相萃取，气相色谱法检测。与这两种方法相比，免疫化学检测法对药物检测具有快速、特异、灵敏、准确、可以批量监测、样品处理简单、能实现自动化操作等优点。而免疫化学法检测硫丹的前提是需要具备针对硫丹的抗体，本申请发明了硫丹人工抗原制备方法，并将其应用于酶联免疫试剂盒中，用时短，操作简单，成本较低，适用于基层单位大批量地检测样品。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够检测蔬菜和水果中硫丹药物残留量的酶联免疫试剂盒，并提供一种高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量检测方法。

本发明试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、硫丹标准品溶液、硫丹抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液，所述包被原为硫丹偶联抗原，所述酶结合物为酶标记的硫丹抗体。

所述硫丹特异性抗体是以一种硫丹人工抗原作为免疫原制备获得，所述硫丹特异性抗体可为硫丹单克隆抗体或硫丹多克隆抗体，其中优选硫丹单克隆抗体。

所述酶结合物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶结合物是由酶和硫丹抗体偶联得到的。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括硫丹标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液。

所述硫丹标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L，1μg/L，3μg/L，9μg/L，27μg/L，81μg/L。

当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，A为过氧化氢或过氧化脲，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1～2mol/L的硫酸溶液或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，所述底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，所述终止液为1～2mol/L氢氧化钠溶液。

所述洗涤液优选为pH值为7.4，含有0.5％～1.0％吐温-20、0.01‰～0.03‰叠氮化钠防腐剂、0.1～0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。

其中在酶标板制备过程中所用到的包被缓冲液为pH值为9.6，0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，封闭液为pH值为7.1～7.5，含有1％～3％酪蛋白、0.1～0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。