[发明专利]一种完全型先天性静止性夜盲果蝇模型的构建方法及应用

说明书

一种完全型先天性静止性夜盲果蝇模型的构建方法及应用，通过构建具有模拟CSNB的果蝇模型，用于研究该病的病理进程和机制，也可用于大规模筛选延缓或治疗该疾病的药物，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学和基因工程技术领域，具体涉及一种完全型先天性静止性夜盲果蝇模型的构建方法及应用。

背景技术

先天性静止性夜盲（CSNB）是一类具有遗传异质性的非进行性视网膜遗传病，主要以视杆细胞功能异常为特征，临床表现为夜盲，视力下降，眼球震颤，近视和斜视等。根据ERG的不同分为两种：Schubert-Bornschein型表现为b波比a波低，伴视敏度下降、近视和眼震；而Riggs型表现为a波和b波等比例降低，视敏度正常，不伴近视和眼震。其中Schubert-Bornschein型又可分为完全型和不完全型：完全型又称为1型，视杆细胞通路功能完全尚失；不完全型又称2型，视杆和视锥细胞通路功能同时受损，视杆功能受损程度较1型轻，但临床症状较1型重。

至今为止，研究发现能引起视网膜疾病的基因突变超过300个，其中7个基因突变能引起Schubert-Bornschein型CSNB，分别为CABP4 (MIM 608965)，GPR179 (MIM 614515)，GRM6(MIM 604096)，LRIT3 (MIM 615004)，TRPM1 (MIM603576)，CACNA1F (MIM 300110)和NYX (MIM300278)。GRM6也称作谷氨酸受体代谢型6，其在视网膜中以一种双极性细胞的亚型特异性表达，这种亚型细胞对光响应而去极化，称为ON双极性细胞。这些细胞与感光细胞形成突触，并通过GPCR信号转导级联检测神经递质谷氨酸。谷氨酸受体GRM6突触后位于双极细胞树突的尖端，并负责启动最终控制TRPM1通道门控的信号级联反应。

人类疾病的动物模型早已应用于医疗，制药等领域，并日渐展现出不可被替代的优势。黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)是生物学研究中最重要的模式昆虫之一, 它在遗传的染色体理论建立、神经科学、发育生物学、人类疾病研究等领域得到广泛应用，作出许多重要贡献。果蝇和人类基因组序列同源性高达60%，而且人体75%的已知致病基因与果蝇身上的相似，因此染色体相对简单的果蝇非常适合人类遗传学或疾病机理的研究。至今已经利用果蝇建立人类疾病模型至少上百种，比如常见的帕金森症、老年痴呆症模型等。因此，果蝇在人类疾病研究中是非常有用的模型。

果蝇中的人类GRM6同源基因为mtt和mGluR，因此可利用mtt和mGluR基因对GRM6基因进行深入研究。

发明内容

本发明发现了mtt基因在促进果蝇模拟表现CSNB和构建CSNB果蝇模型中的新用途。

经本发明人试验发现，GRM6基因新的突变位点p.R192Q能引发CSNB，并且进一步试验发现利用果蝇中与GRM6基因同源的mtt基因，可得到与突变位点p.R192Q对应的突变位点p.R217Q，上述两个基因包含突变氨基酸的片段序列为：

因此，以此发现为基础构建获得CSNB果蝇模型，该CSNB果蝇模型可用于研究该病的病理进程和机制，也可用于大规模筛选延缓或治疗该疾病的药物，具有很好的应用前景。

本发明提供了mtt基因在促进果蝇模拟表现CSNB中的应用，所述mtt基因包含p.R217Q突变氨基酸的片段为：180VTSIQVANLLRLFRIPQVSYFSTSPELSNKQRFEYFSRTIPSDHYQVKAMVEIVKRMGWS 238。

本发明还提供了mtt基因在构建CSNB果蝇模型中的应用，所述mtt基因包含p.R217Q突变氨基酸的片段为：

180 VTSIQVANLLRLFRIPQVSYFSTSPELSNKQRFEYFSRTIPSDHYQVKAMVEIVKRMGWS 238。