[发明专利]一种固定化酶制备γ-氨基丁酸的工艺

权利要求书

1.一种固定化酶制备γ-氨基丁酸的工艺，其特征在于：包括以下步骤：

（1）制备固定化谷氨酸脱羧酶：

a.制备离子液体再生纤维素载体；将离子液体再生纤维素载体加入到高碘酸钠溶液中，改性结束后取出、直接冷冻冻干，部分高碘酸钠附着在微球载体上，得到高碘酸钠改性的载体；采用浓度为0.5~1mol/L的高碘酸钠溶液，且离子液体再生纤维素载体和高碘酸钠的投加比例为1g：（0.05~0.1）mol；

b. 将海藻糖、普鲁兰多糖和氧化石墨烯混合后高速匀浆得到热稳定剂，并加入到谷氨酸脱羧酶液中得到热稳定处理后的酶液；谷氨酸脱羧酶液的浓度为4~7mg/mL；

c.向热稳定处理后的酶液中加入还原型谷胱甘肽，并使得还原型谷胱甘肽的质量浓度为0.3~0.8mg/mL，得到活性处理后的酶液；

d. 将高碘酸钠改性的载体加入到活性处理后的酶液中，谷氨酸脱羧酶和载体混合质量比为（0.25~0.3）：1；密封、并置于25~30℃水浴震荡12~16h，然后取出载体、并用去离子冲洗，冷冻冻干得到固定化谷氨酸脱羧酶；过量的高碘酸钠将还原性谷胱甘肽中的活泼巯基-SH氧化为具有吸电子性的砜；

（2）以浓度为1~2%的谷氨酸溶液为底物，所述固定化谷氨酸脱羧酶为酶源，将谷氨酸转化为γ-氨基丁酸。

2.根据权利要求1所述的一种固定化酶制备γ-氨基丁酸的工艺，其特征在于：步骤（2）中，将所述固定化谷氨酸脱羧酶填充于反应柱中，在35~40℃下，使得谷氨酸溶液以1.1~1.3V柱体积/h的流速流经反应柱。

3.根据权利要求1所述的一种固定化酶制备γ-氨基丁酸的工艺，其特征在于：冷冻冻干条件为：以液氮于-85℃~-75℃下冷冻干燥18~24h。

4.根据权利要求1所述的一种固定化酶制备γ-氨基丁酸的工艺，其特征在于：步骤a的处理步骤包括：将纤维素溶解于离子液体中，置于100~120℃下磁力搅拌溶解5~7h后静置12~16h，得到离子液体/纤维素混合溶液；然后将离子液体/纤维素混合溶液用注射器滴加至去离子水中，使得离子液体/纤维素混合溶液再生成小球；将小球用去离子水冲洗后自然晾干，得到离子液体再生纤维素载体。

5.根据权利要求4所述的一种固定化酶制备γ-氨基丁酸的工艺，其特征在于：纤维素和离子液体的投加质量比为（10~15）：100。

6.根据权利要求4所述的一种固定化酶制备γ-氨基丁酸的工艺，其特征在于：所述离子液体选用[BMIM]Cl、[C₄MIM]Cl中的一种。