[发明专利]一种用于构建组织工程化视网膜色素上皮的生物膜的制备方法

说明书

本发明涉及生物学领域，具体公开了一种用于构建组织工程化视网膜色素上皮的生物膜的制备方法，包括以下步骤：S1：将聚已内酯、明胶和氧化石墨烯均匀溶解于极性溶剂中，得到混合溶液，混合溶液中聚已内酯、明胶和氧化石墨烯的质量百分比浓度分别为69.6％、29.8％和0.6％；S2：将S1得到的混合溶液置于连接有高压发生器的微量注射泵中进行静电纺丝，即得到生物膜。通过本发明可制备出既支持ESC‑RPE细胞生长和功能，又可兼顾生物相容性和手术操作性的纳米纤维复合膜。

技术领域

本发明涉及生物学领域，尤其涉及一种用于构建组织工程化视网膜色素上皮的生物膜的制备方法。

背景技术

视网膜色素上皮(RPE)是位于视网膜与脉络膜之间的单层细胞，具有分泌营养因子，吞噬感光细胞外节，参与视循环代谢等功能，对于维持视网膜的正常生理功能具有十分重要的作用。RPE功能障碍将导致感光细胞凋亡，引起如年龄相关性黄斑变性(AMD)和视网膜色素变性(RP)等视网膜变性疾病。这类疾病在我国发病趋势逐年上升，但尚缺乏有效治疗措施。

组织工程化RPE移植是将RPE细胞培养在生物膜上，形成有极性、有功能的单层RPE细胞片后，再将RPE细胞片和生物膜复合体移植到视网膜下腔，是治疗视网膜变性疾病最有前景的方法。组织工程化RPE所需要的两大要素是种子细胞和生物膜。在种子细胞方面，胚胎干细胞(ESC)分化而来的RPE细胞(ESC-RPE)具有与体内RPE细胞相似的形态和功能，无基因变异风险，分化效率高，可实现标准化、产业化生产，是理想的种子细胞。

然而，通过现有工艺制备的生物膜，在支持RPE细胞生长和功能的前提下，并无法兼顾生物相容性和手术操作性，从而限制了组织工程RPE移植的进一步应用。

为解决上述问题，就需要一种用于构建组织工程化视网膜色素上皮的生物膜的制备方法，可制备出既支持ESC-RPE细胞生长和功能，又可兼顾生物相容性和手术操作性的纳米纤维复合膜。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于构建组织工程化视网膜色素上皮的生物膜的制备方法，可制备出既支持ESC-RPE细胞生长和功能，又可兼顾生物相容性和手术操作性的纳米纤维复合膜。

为达到上述目的，本发明提供了一种用于构建组织工程化视网膜色素上皮的生物膜的制备方法，包括以下步骤：

S1：将聚已内酯、明胶和氧化石墨烯均匀溶解于极性溶剂中，得到混合溶液，混合溶液中聚已内酯、明胶和氧化石墨烯的质量百分比浓度分别为69.6％、29.8％和0.6％；

S2：将S1得到的混合溶液置于连接有高压发生器的微量注射泵中进行静电纺丝，即得到生物膜。

作为对上述技术方案的进一步改进，在步骤S1中，所述极性溶剂为六氟异丙醇。

作为对上述技术方案的进一步改进，在步骤S1中，所述氧化石墨烯为粉末状并通过以下步骤制备：

S11：取10g 32目高纯石墨，0℃下加入到500mL浓硫酸中；

S12：再加入60g KMnO₄，升温到35℃，搅拌；

S13：加水稀释后，加入H₂O₂至溶液呈黄色，加入HCl离心洗涤，透析至PH＝6.0；

S14：离心10min后取上层清液，冷冻干燥后即得到氧化石墨烯粉末。

作为对上述技术方案的进一步改进，在步骤S2中，静电纺丝参数为：总浓度8％-10％，电压10-15kV，喷头到接收器距离10-20cm，电纺流速1-3mL/h。

与现有技术相比，本发明具有以下有益技术效果：