[发明专利]一种对组织样本进行免疫标记的方法

说明书

本发明公开了一种对组织样本进行免疫标记的方法，具体地，本发明(a)提供一标记体系，所述标记体系含有待进行免疫标记的组织样本、用于对所述组织样本进行标记的探针和缓冲液；和(b)将所述的标记体系置于电场作用下进行标记处理，从而使得所述的探针进入所述组织样本内部，从而对所述组织样本进行免疫标记，获得经免疫标记的组织样本。本发明不仅能够缩短探针进入组织样本内部的时间，还能保持组织内部的完整性，具有极大的应用价值。

本申请是申请日为2015年4月30日、申请号为201510219570.4、发明名称为“一种对组织样本进行免疫标记的方法”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种对组织样本进行免疫标记的方法。

背景技术

研究生物医学组织在细胞和亚细胞尺度的三维空间结构，是理解其正常功能的基础，也能为掌握器官疾病的发生和发展过程提供依据。以前对人和其它动物组织的研究主要为解剖学尺度的研究，而在细胞和亚细胞尺度的研究则受限于解析能力的限制，通常只能研究组织切片的结构信息。基于组织连续切片的三维重构技术研究组织则非常耗时和费力。

近年来组织透明化技术的迅猛发展使人们获得完整生物组织的高分辨率三维结构成为可能，目前最常用的是CLARITY技术，其通过将水凝胶(Hydrogel)的交联形成的多聚物与组织中的生物分子(蛋白和DNA等)固定，并通过使用十二烷基硫酸钠(SDS)去掉细胞膜等对光线具有很强散射的生物分子，能在保证组织结构不被破坏的前提下，快速将生物组织透明化，并实现完整组织的深度(～6mm)三维成像。CLARITY技术最早应用于小鼠脑组织的透明化和结构研究，并逐步拓展到整个小鼠中主要器官(肾脏、肝等)，展示了这种技术在获取生物组织完整三维高分辨率结构信息方面的巨大潜在价值。

然而，将CLARITY技术用于研究完整组织三维高分辨率结构时，标记探针(特别是抗体)从完整组织的表面到达组织内部需要很长的时间，极大的阻碍了该技术的推广和应用。例如，对于5mm厚的完整小鼠大脑样品，一个完整免疫标记需要至少1.5月的时间才能完成。

因此，本领域迫切需要开发一种能够极大程度的缩短组织样本的免疫荧光标记时间，并且还能保持组织内部完整性的快速免疫标记方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够极大程度的缩短组织样本的免疫荧光标记时间，并且还能保持组织内部完整性的快速免疫荧光标记方法。

本发明的第一方面提供了一种对组织样本进行免疫标记的方法，包括步骤：

(a)提供一标记体系，所述标记体系含有待进行免疫标记的组织样本、用于对所述组织样本进行标记的探针和缓冲液；和

(b)将所述的标记体系置于电场作用下进行标记处理，从而使得所述的探针进入所述组织样本内部，从而对所述组织样本进行免疫标记，获得经免疫标记的组织样本。

在另一优选例中，在步骤(b)中，所述标记处理的时间为1min-5h时，较佳地，20min-1h，更佳地，30min。

在另一优选例中，在步骤(b)中，所述标记处理的温度为4-50℃，较佳地，10-40℃，更佳地，37℃。

在另一优选例中，所述的方法还包括：(c)对所述经免疫标记的组织样本进行检测。

在另一优选例中，在步骤(c)中，所述的检测包括荧光检测。

在另一优选例中，所述的电场具有以下特征：电压为25V，电极间距离为2.2cm,电场强度为11.3V/cm。

在另一优选例中，所述的标记体系的pH为5-11。

在另一优选例中，所述的探针包括：抗体、核酸探针。

在另一优选例中，所述的探针带有可检测标志物。