[发明专利]一种降胆固醇蛋白质的制备方法

说明书

本发明公开了一种降胆固醇蛋白质的制备方法，属于功能蛋白制备领域。先将蛋白溶液或者悬浊液预热后，采用高强度超声修饰蛋白；然后对蛋白进行低强度超声—酶解耦合改性，超声修饰后的蛋白加入中性蛋白酶进行酶解改性，以胃肠消化后产物的最高降胆固醇活性为水解终点，停止酶解，灭酶，冷却后进行浓缩和喷雾干燥，制备成降胆固醇功能蛋白。在此条件下，酶解物的降胆固醇活性和原料相比提高了4倍以上，和高强度超声修饰蛋白相比提高了2倍以上，和低强度超声—酶解耦合改性蛋白相比增加了44.90％以上。

技术领域

本发明属于功能蛋白制备领域，特别涉及通过蛋白修饰和改性制备降胆固醇功能蛋白的方法。

背景技术

自然界中的食源性蛋白，除了一些少数蛋白，如免疫球蛋白，能抵抗胃肠的消化作用，进而起到提高免疫力等生理学功能，大部分蛋白经胃肠消化降解成小分子肽和氨基酸，发挥其营养学功能。简言之大多数蛋白在经过胃肠消化后，其高级结构遭到破坏，无法体现生理功能价值。若采用适当的处理方法对蛋白进行改性，可使蛋白在进入胃肠道后，在完全消化前保留一些有益的高级结构，即可实现部分生理学功能。酶法改性蛋白可以将长链蛋白酶解成短链蛋白，短链蛋白在胃肠消化的作用下，理论上会产生具有生理学功能的更小分子量的肽片段，进而发挥其生理学功能。

蛋白的生理学功能取决于蛋白的高级结构，除了蛋白的酶法改性以外，其他的物理学方法也可以使蛋白改性，比如，超声波技术可以改变蛋白的构象，超声波处理蛋白可以增加蛋白的表面疏水性、可酶解性、溶解性、增加巯基含量和改变蛋白质二级结构的组成(Yang et al.,Effects of low power density multi-frequency ultrasoundpretreatment on the enzymolysis and the structure characterization ofdefatted wheat germ protein,2017；Yang et al.,Effects and mechanism ofultrasound pretreatment of protein on the Maillard reaction of protein-hydrolysate from grass carp(Ctenopharyngodon idella),2020)，超声通过改变蛋白构象，对蛋白进行修饰改性，可进一步提高功能蛋白的功能活性。

高胆固醇病是指血液里的胆固醇超过正常范围，血脂增高，从而导致冠状动脉壁形成动脉阻塞斑块，引发动脉粥样硬化，增加心脑血管疾病的风险。目前利用超声修饰并结合酶法改性技术制备功能蛋白，使之在消化道中经过胃肠蛋白酶消化后，发挥降胆固醇功能的研究还未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供了一种降胆固醇蛋白质的制备方法，具体是将蛋白在超声修饰的基础上，采用超声—酶解耦合改性，进而得到降胆固醇活性的功能蛋白。

为了实现上述发明目的，其具体的技术方案如下：一种降胆固醇蛋白质的制备方法，按照下述步骤进行：

(1)蛋白的高强度超声修饰：将蛋白溶液或者悬浊液(浓度10～100g/L)预热后，采用超声进行修饰处理，超声处理参数如下：超声功率密度50～500W/L，超声处理时间5～60min。

(2)蛋白的低强度超声—酶解耦合改性：对超声修饰后的蛋白加入蛋白酶进行酶解改性，然后调节温度至50℃，pH至7.0，加入5％中性蛋白酶(E/S)开始酶解，并维持酶解条件恒定，酶解改性过程在低强度超声场中进行，超声功率密度为5～20W/L，以体外模拟胃肠道消化后产物的最高降胆固醇活性为水解终点，停止酶解，灭酶，冷却后进行浓缩和喷雾干燥，制备成降胆固醇功能蛋白。

其中步骤(1)所述的蛋白，为可溶于水的蛋白，例如牛奶蛋白、蛋清蛋白。也可以为不易溶于水的蛋白，例如玉米蛋白、大米蛋白。