[发明专利]一种检测中药材银杏叶中咖啡因含量的方法

权利要求书

1.一种检测中药材银杏叶中咖啡因含量的方法，所述方法采用超高效液相色谱-串联质谱测定方法，其中，采用Waters Acquity UPLC I-Class超高效液相色谱仪串联Xevo TQ-S micro三重四极杆质谱仪，进行测定，其特征在于，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备：取银杏叶样品适量，研成粉末，过四号筛，混匀,称取粉末1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇8-12mL，密塞，称重，超声提取8-12min，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.2μm针筒式过滤器过滤，取续滤液，高速离心10-20min，转数10000-15000转/分钟，得上清液，即为供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：取咖啡因对照品2.50mg，精密称定，置于5mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为500μg/mL咖啡因对照品溶液；

3)取供试品溶液和对照品溶液，注入液质联用仪，以咖啡因对照品峰为参照峰，记录峰面积，根据峰面积计算供试品溶液中的咖啡因含量；

其中，液相色谱条件：色谱柱：Waters CORTECS T3色谱柱2.1×100mm,2.7μm；流动相：A为含0.1％甲酸水溶液，B为含0.1％甲酸乙腈溶液，梯度洗脱，0～5min，95％A；5～22min，95％～2％A；22～27min，2％A；27～27.5min，2％～95％A；27.5～32min，95％A；流速：0.3mL/min；柱温30℃；进样量2μL；

质谱参数条件：正离子模式；毛细管电压：0.5kV；离子源温度：150℃；雾化温度：500℃；雾化器流速：1000L/h；多反应监测模式；离子对195.112→138.065定量、195.112→110.037定性；驻留时间分别为0.165s、0.165s；锥孔电压分别为4.0V、4.0V；碰撞能量分别为18.0V、22.0V。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤如下：

1)供试品溶液的制备：取银杏叶样品适量，研成粉末，过四号筛，混匀,称取粉末1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，称重，超声提取10min，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.2μm针筒式过滤器过滤，取续滤液，高速离心15min，转数12000转/分钟，得上清液即为供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：取咖啡因对照品2.50mg，精密称定，置于5mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为500μg/mL咖啡因对照品溶液；

3)取供试品溶液和对照品溶液，注入液质联用仪，以咖啡因对照品峰为参照峰，记录峰面积，根据峰面积计算供试品溶液中的咖啡因含量；

其中3)色谱、质谱条件采用的仪器是Waters Acquity UPLC I-Class超高效液相色谱仪串联Xevo TQ-S micro三重四极杆质谱仪，参数如下：

液相色谱条件：色谱柱：Waters CORTECS T3色谱柱2.1×100mm,2.7μm；流动相：A为含0.1％甲酸水溶液，B为含0.1％甲酸乙腈溶液，梯度洗脱，0～5min，95％A；5～22min，95％～2％A；22～27min，2％A；27～27.5min，2％～95％A；27.5～32min，95％A；流速：0.3mL/min；柱温30℃；进样量2μL；

质谱参数条件：正离子模式；毛细管电压：0.5kV；离子源温度：150℃；雾化温度：500℃；雾化器流速：1000L/h；多反应监测模式；离子对195.112→138.065定量、195.112→110.037定性；驻留时间分别为0.165s、0.165s；锥孔电压分别为4.0V、4.0V；碰撞能量分别为18.0V、22.0V。