[发明专利]建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法

说明书

本发明公开了建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK‑PD同步模型的方法，包括：绘制猪胞内劳森菌在IPEC‑J2细胞中的生长曲线；测定替米考星对猪胞内劳森菌胞内和胞外最低抑菌浓度、防突变浓度及抗菌后效应，绘制体外和半体内胞内杀菌曲线；根据所测的猪胞内劳森菌半体内胞内杀菌曲线，选择合适的PK‑PD参数，拟合数据，建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK‑PD同步模型，制定合理的给药方案。本发明可制定替米考星对猪胞内劳森菌的给药方案，为科学养殖提供稳定的用药数据支持，科学指导临床用药；有效缓解猪胞内劳森菌对替米考星的耐药性产生，保护和维持替米考星的有效性，并为抗菌药物对胞内菌的PK‑PD同步模型的研究提供指南。

技术领域

本发明涉及PK-PD同步模型技术领域，特别是涉及一种建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法。

背景技术

胞内劳森菌(Lawsonia Intracellularis，L.intracellularis)属于脱硫弧菌属，革兰氏阴性菌，呈弧形弯曲状、逗点状或S形，大小为1.25～1.75μm×0.25～0.43μm，专性寄生于动物肠道细胞中，可引起以回肠和结肠隐窝内未成熟的肠细胞腺瘤样增生为特征的猪增生性肠炎(PPE)。虽PPE死亡率不高，但该病可引起病猪腹泻、生长缓慢等临床症状，严重降低动物的饲料利用率，进而造成巨大的经济损失。

随着猪增生性肠炎对抗生素的耐药日益严重，越来越多的药物已经不能用于临床上对猪增生性肠炎的治疗，因此通过严谨的科学手段控制和减缓耐药性的产生和传播任重道远。替米考星作为新型大环内酯类抗生素，对细胞膜有很强的渗透性，能较快透过细胞膜达到胞内，具有良好的肠细胞内蓄积能力。此外胞内劳森菌的体外抑菌试验结果表明，替米考星对胞内劳森菌具有比其他抗菌药物更强的抗菌活性。因此，替米考星可作为目前临床胞内劳森菌感染的首选药物。为了科学有效使用替米考星在猪增生性肠炎治疗上的应用、减缓其耐药性的产生，以及帮助我国兽医工作者在临床过程中有规可依，合理给药方案的制定对于解决现有技术中药物使用不足之处具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法，通过测定替米考星对猪胞内劳森菌的药效学和在猪体内的药动学参数，制定出替米考星对猪胞内劳森菌的合理给药方案，为科学养殖提供稳定的用药数据支持，能更科学的进行指导临床用药，以及有效治疗猪增生性肠炎并对临床用药提供参考；能够在一定程度上有效缓解猪胞内劳森菌对替米考星的耐药性产生，保护和维持替米考星的有效性；能够为药物对胞内菌的PK-PD同步模型的研究提供指南。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供了建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法，包括以下步骤：

步骤1：测定替米考星对猪胞内劳森菌的药效学和在猪体内的药动学参数：采用荧光定量PCR法计数，绘制猪胞内劳森菌在猪空肠上皮细胞IPEC-J2中的生长曲线。具体过程为：将猪空肠上皮细胞铺于24孔板中，待细胞汇合度为60％左右时，加入胞内劳森菌(浓度为5×10⁵L.intracellularis/mL)，培养3h后，去除上清液，用PBS清洗3次，此时记为0h，更换新鲜细胞培养基，分别在0、6、12、18、24h和2、3、4、5、6、7、8d取样，用荧光定量PCR测定细菌的含量，绘制出胞内劳森菌的生长曲线。