[发明专利]一种梨幼胚培养方法

权利要求书

1.一种梨幼胚培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)外植体消毒处理：选取授粉后5-6周的未成熟梨果实，采摘后先在低温条件下进行春化处理3-5d，将春化处理后的果实用水冲洗后剥去果皮、果肉，获得未成熟幼胚或带有种皮的成熟幼胚，再将未成熟幼胚或带有种皮的成熟幼胚用水充分清洗后吸干表面水分；在超净工作台上，以70％-75％乙醇浸泡未成熟幼胚或带有种皮的成熟幼胚10-30s，再用无菌水清洗，然后使用3.3％次氯酸钠溶液消毒4-6min，再用无菌水清洗后吸干未成熟幼胚或带有种皮的成熟幼胚表面水分后备用；

(2)幼胚培养：将步骤(1)处理后的带有种皮的成熟幼胚用已灭菌的镊子和解剖刀剖开种皮取出成熟幼胚，将未成熟幼胚或成熟幼胚接种于幼胚培养基上，进行幼胚培养；接种后置于每天光照10-14h，光照强度为800-1000μmolm^-2s^-1，相对湿度为70％-75％，培养温度为22-28℃的条件下培养至幼胚萌发，继续培养获得长出2-3对真叶的幼苗；

(3)生根培养：将步骤(2)所获得的长出2-3对真叶的幼苗在根颈以下0.6-1.2cm处剪断主根后接种到生根培养基上进行促根培养，接种后先在25-28℃条件下全暗培养1-3d，然后置于每天光照12-14h，光照强度为800-1000μmolm^-2s^-1，相对湿度为70％-75％，培养温度为22-28℃的条件下培养至生根；

(4)炼苗移栽：待幼苗长至3-5cm高后置于自然光照下炼苗5-7d，洗净根部培养基，移栽至草炭土基质中，覆膜，并向基质和叶片施用1/4MS大量元素营养液，保持湿度，7d后逐渐撤去覆膜，并逐步减少营养液施用次数，待幼苗成活后再移栽大田。

2.根据权利要求1所述的梨幼胚培养方法，其特征在于，步骤(2)所述的幼胚培养基为：MS+1.8-2.0mg/L 6-BA+0.1-0.2mg/L IBA+0.5％-0.7％琼脂，pH值为5.6-5.9。

3.根据权利要求1所述的梨幼胚培养方法，其特征在于，步骤(3)所述的生根培养基为：1/2MS+0.4-0.5mg/L IBA+0.5％-0.7％琼脂，pH值为5.6-5.9。

4.根据权利要求1所述的梨幼胚培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述的低温条件为1-7℃条件。