[发明专利]一种用家兔检验猪塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法

说明书

本发明公开了一种用家兔检验猪塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法，属于兽用生物制品领域。本发明包括使用猪塞内卡病毒病灭活疫苗对若干健康易感家兔进行免疫接种；免疫接种28d后，使用塞内卡病毒液对已免疫家兔进行攻毒；攻毒后连续观察15d，当至少4/5的家兔攻毒后未表现临床症状，即可判定猪塞内卡病毒病灭活疫苗保护效力合格。该方法可以有效使用家兔代替实验猪建立塞内卡病毒灭活疫苗效力检验的替代方法，有效缩减成本，并且操作简单易行、安全便捷。

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及一种用家兔检验猪塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法，尤其涉及一种可替代猪做免疫攻毒试验的猪塞内卡病毒病灭活疫苗效力的检验方法。

背景技术

塞内卡病毒(Seneca virus A，SVA)，是一种能引起猪水泡样症状的病毒，近年来国内外发病情况比较严重。该病毒为单股正链不分节的RNA病毒，隶属小RNA毒科Senecavirus病毒属，临床证据表明，该病毒感染猪后可使感染猪出现水泡性病变和新生仔猪死亡，症状与口蹄疫极为相似，容易发生混淆。该病毒最早发现于1998年，2014年在巴西发生大规模暴发后才逐渐被人们所重视。

对该病的防治主要以预防为主，然而，目前我国尚无塞内卡病毒病商品化疫苗，试验苗正处于研发检验阶段。其中塞内卡病毒试验苗的效力检验主要依靠猪体进行，由于非洲猪瘟影响，猪买卖和运输受限，价格升高，而且实验猪的采购十分困难且不再安全可靠，直接导致塞内卡病毒病灭活疫苗的研发工作受阻。因此，建立一种塞内卡病毒病灭活疫苗效力检验的替代方法对塞内卡病毒灭活疫苗的开发至关重要，同时可以大大节省研发费用。

发明内容

针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本发明一个方面提供一种用家兔检验猪塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法，包括以下步骤：

1)使用猪塞内卡病毒病灭活疫苗对若干健康易感家兔进行免疫接种；

2)免疫接种28d后，使用塞内卡病毒液对已免疫家兔进行攻毒；

3)攻毒后连续观察15d，当至少4/5的家兔攻毒后未表现临床症状，即可判定猪塞内卡病毒病灭活疫苗保护效力合格。

上述方法中，步骤1)中所述健康易感家兔的血清中塞内卡病毒血清中和抗体效价＜1:2。

上述方法中，步骤1)中对家兔免疫接种的剂量为至少1.0ml，接种途径采用腿部肌肉注射。

上述方法中，步骤2)中对已免疫家兔进行攻毒的毒量为至少2×10^8.5TCID₅₀。

上述方法中，步骤2)使用的塞内卡病毒液的毒价为至少10^7.5TCID₅₀/0.1ml，攻毒剂量为至少2.0ml/只。

上述方法中，步骤2)中攻毒的方式包括但不限于滴鼻途径。

上述方法中，步骤3)中所述临床症状为家兔鼻部、唇部及鼻唇交界部位少毛或无毛处出现粟粒大小白色或红色凸起，且症状持续2～3天。

本发明另一方面提供一种用家兔从症状上区分塞内卡病毒与口蹄疫病毒的方法，其包括以下步骤：

a)用病毒液样品接种家兔；

b)连续观察，发现接种后家兔出现临床症状，即判定为含有塞内卡病毒，无临床症状则判定为口蹄疫病毒；其中所述临床症状为家兔鼻部、唇部及鼻唇交界部位少毛或无毛处出现粟粒大小白色或红色凸起。

上述病毒液样品包括猪水泡样病变部位的病毒提取液、口蹄疫病毒疫苗生产原料。

上述病毒液样品的毒价为至少10^7.5TCID₅₀/0.1ml，接种剂量为至少2.0ml/只。