[发明专利]一种抑制NK细胞KIR 2DL2受体表达的siRNA及其应用

说明书

本发明实施例公开了一种抑制NK细胞KIR 2DL2受体表达的siRNA及其应用，属于生物技术领域。所述siRNA序列为2DL2‑1或/和2DL2‑2，其中，2DL2‑1的正义链如SEQ ID NO.5所示，反义链如SEQ ID NO.6所示；2DL2‑2的正义链如SEQ ID NO.7所示，反义链如SEQ ID NO.8所示。本发明的siRNA能明显特异性抑制KIR 2DL2受体表达，可使NK细胞激活，杀伤活性显著增强，能够有效应用于抗病毒和抗肿瘤的防治中。

技术领域

本发明实施例涉及生物技术领域，具体涉及一种通过抑制NK细胞KIR2DL2受体表达的siRNA技术及其应用。

背景技术

干细胞和免疫细胞是现代医学最热点的前沿技术领域，可以说，现代医学的重大疾病、常见疾病、慢性疾病、衰老与退化性疾病的治疗，没有这两个细胞的参与，将很难有飞跃性的进步。其中免疫细胞是人体免疫学的功能主体，在免疫系统中发挥支柱的作用。自然杀伤细胞(NK细胞)是细胞免疫的重要成员，也是先天免疫的重要组成部分，由于其发挥先天免疫、基础免疫、免疫调节的重要作用，而且在发挥作用时不需要预先活化，所以，在人体免疫系统功能发挥中占有重要一席，在免疫学领域临床应用中得到业界的高度重视。

近年来，NK细胞受到业界的高度重视，在癌症预防、肿瘤免疫治疗、健康管理和抗衰老等方面应用得到青睐。NK细胞发挥先天免疫、基础免疫的重要作用；而且在发挥作用时不需要预先活化，能在病原侵入人体的第一时间及时消灭和清除病原，避免引起疾病；也能在体内不需要预警、指示、动员等过程而直接杀死变异、癌变、衰老退化的细胞，是人体前沿防御、维持内环境稳定、免疫系统协同作战的重要组成部分。由于NK细胞的上述功能角色和作用特点，其能发挥很好的便捷、广谱、非特异作用，但随之出现的缺陷是非特异性、针对性作用相对较弱，尤其是在病毒性疾病、恶性疾病等治疗中，时常表现出作用力不足、疗效不确定等问题。

杀伤免疫球蛋白样受体(killer immunoglobulin-like receptors，KIR)是免疫球蛋白样超家族的成员，是NK细胞上的抑制性调节通路，可抑制NK活化和裂解活性。KIR受体是一个家族，有18个成员，分别是KIR 1D、KIR 2DL1-5、KIR 2DS1-5、KIR 3DL1-3、KIR3DS1、假基因xv、x和KIR 2DP1。依据目前国际KIR基因命名方法，KIR基因中的D代表其胞外结构中的Ig样结构，2D、3D代表胞外有2个或3个Ig样结构，L和S代表胞内尾段的长短，置于命名的末尾，后面的数字表示各个不同的成员。研究表明，通过调节KIR受体通路活性，可以提高NK细胞杀伤功能。

现有技术记载KIR受体封闭策略，主要通过抗体技术实现，具有操作方便、封闭效果好的优点。但细胞与抗体的铰链，造成这种策略的应用中容易出现以下缺陷：(1)携带抗体的NK细胞反复输注有一定的免疫副作用，产生异常免疫反应或发热等；(2)铰链抗体的NK细胞已经失去了其自然的特点，进入体内很容易被人体免疫识别为病态细胞而被杀死，或也会诱导身体异常免疫反应。

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，并且副作用会很弱，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。

目前，通过KIR受体RNA干扰的技术活化NK细胞的专利只涉及到KIR 3DL1的活化，主要用于抗艾滋病的研究中。研究表明，KIR 2DL1基因表达频率在中国人是82.6％，覆盖了大多数个体，KIR 2DL2基因表达频率是47.8％，KIR 2DL3基因表达频率是63.0％，三个基因表达可以覆盖所有中国人，可以通过检测三种KIR受体表达与否和表达强度，选择其中一种KIR基因进行干扰沉默。因此，本研发团队对上述三个基因沉默技术进行研究，以开展针对三个基因分别调控的研究领域应用。

发明内容