[发明专利]一种基于RU61_00441基因的德尔卑沙门氏菌恒温检测试剂盒及方法

说明书

本发明提供一种等温检测德尔卑沙门氏菌的RPA引物和检测方法。其引物序列如下：针对RU61_00441基因：上游引物SEQ ID NO.1：5’‑GACCAGTTCTTCTTCATGACCTACG AAATC‑3’；下游引物SEQ ID NO.2：5’‑TTAATCCACACCTTTGGCGGAA TTAGCTTA‑3’。本发明基于重组酶聚合酶扩增技术实现德尔卑沙门氏菌的快速准确的检测。本发明提供的检测方法包括：(1)提取样品DNA，RPA扩增(2)凝胶电泳检测扩增产物(3)比较电泳后条带，如果在200bp位置有条带，则证明样品中含有德尔卑沙门氏菌。本发明的试剂盒及方法可以特异的区分血清型德尔卑沙门氏菌和沙门氏菌的其它血清型，适合企业的现场检测。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种基于RU61_00441基因的德尔卑沙门氏菌恒温检测试剂盒及方法。

背景技术

沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌。沙门氏菌鉴定的传统方法主要是根据形态学特征、培养特征、生理生化特征、抗原特征、噬菌体特征等。德尔卑沙门氏菌不但能引起禽畜疾病，还能导致人们食物中毒。它的检测是致病菌检测的一个重要环节，在公共卫生等场合有重要意义。

现有的德尔卑沙门氏菌检测方法需要血清型实验，检测时间长、设备昂贵，不便于在基层推广使用。

发明内容

本发明的目的是通过基因组比较分析获得德尔卑沙门氏菌的特异性检测靶基因，从而通过特异性引物对进行恒温RPA扩增、电泳检测该目的基因，解决了检测结果不准确，检测过程复杂，检测周期长的问题，实现了德尔卑沙门氏菌高特异性、快速、现场检测的目的。

一种用于检测德尔卑沙门氏菌的RPA引物对，其特征在于，其引起序列如下：针对RU61_00441基因，

上游引物SEQ ID NO.1：5’-GACCAGTTCTTCTTCATGACCTACGAAATC-3’

下游引物SEQ ID NO.2：5’-TTAATCCACACCTTTGGCGGAATTAGCTTA-3’。

一种用于检测德尔卑沙门氏菌的RPA引物于检测德尔卑沙门氏菌上的应用，其特征在于，利用RPA引物检测德尔卑沙门氏菌的方法包括以下步骤：

(1)提取样品DNA，RPA扩增；(2)凝胶电泳检测扩增产物；(3)比较电泳后条带，如果在200bp位置有条带，则证明样品中含有德尔卑沙门氏菌。

所述的用于检测德尔卑沙门氏菌的RPA引物于检测德尔卑沙门氏菌上的应用，其特征在于，利用RPA引物检测德尔卑沙门氏菌的方法包括以下步骤：

(1)提取待测样品DNA；

(2)根据如权利要求1所述的序列组合成RPA特异性引物，进行RPA扩增反应；

(3)采用琼脂糖凝胶电泳，在紫外灯下判定扩增结果，比较电泳后条带，如果在200bp位置有条带，则证明样品中含有德尔卑沙门氏菌。

所述的用于检测德尔卑沙门氏菌的RPA引物于检测德尔卑沙门氏菌上的应用，其特征在于：

其中使用的RPA扩增反应检测体系，50ul包含有：1×反应缓冲液44ul，10uM引物对各2ul，模板取2ul。

用于检测德尔卑沙门氏菌的RPA引物于检测德尔卑沙门氏菌上的应用，其特征在于，RPA扩增反应程序参数为：37℃，反应时间25-30min，采用琼脂糖凝胶电泳。

一种利用检测德尔卑沙门氏菌的RPA引物检测德尔卑沙门氏菌的试剂盒，其特征在于：包含如权利要求1所述的RPA引物对。本发明提供检测德尔卑沙门氏菌的方法，其中，电泳后200bp位置分离出的DNA片段，其检测结果为阳性。