[发明专利]检测样品中聚集体颗粒在目标粒径下浓度的非标记方法

说明书

本发明涉及药品中聚集体颗粒浓度检测领域，具体涉及一种检测样品中聚集体颗粒在目标粒径下浓度的非标记方法。该方法包括：在流式细胞仪上分别采用FSC和SSC通道检测所述样品在激发的前向散射光和侧向散射光，其中，目标粒径为0.1‑1μm区间，FSC检测电压405‑435V，SSC检测电压290‑310V，SSC阈值600‑1200；目标粒径为1μm以上区间，FSC检测电压175‑205V，SSC检测电压120‑140V，SSC阈值600‑1200。采用本发明的方法能够同时对样品中1微米以下和200纳米以上的可溶性聚集体颗粒以及1微米以上的不溶性聚集体颗粒进行高灵敏度、高分辨率和精准定量地检测。

技术领域

本发明涉及药品中聚集体颗粒浓度检测领域，具体涉及一种检测样品中聚集体颗粒在目标粒径下浓度的非标记方法。

背景技术

生物制品如重组蛋白药物、疫苗、血制品中的人免疫球蛋白，以及某些基因治疗载体、复杂注射剂、中药注射剂等与小分子药物相比，分子量大、结构复杂、修饰较多、动态变化频繁、工艺控制较难，生产、纯化、灌装、运输、保存过程中都有可能发生聚集的现象，从而影响生物制品的质量和免疫原性，进而影响药品的安全性和有效性，所以从上世纪90年代末以来就受到制造和监管部门的广泛关注。随着制药工艺水平的发展，可监测范围内的产品聚集状况比20年前有了很大改善，但难以做到完全去除，且监测范围本身存在较大空白区域。

目前发达国家药典USP788＞、787＞、1787＞和EP2.9.19＞中对10μm以上的不溶性聚集体颗粒的检测方法和放行标准均做了规定；同时指出小于10μm的颗粒分布也可能是重要的产品质量参数之一，所以建议收集蛋白质注射制剂中2-10μm颗粒的数据。近年美国FDA又将监管目标从10μm以上、2-10μm延伸到了0.1-2μm，指明了未来相关药品标准和监管法规的升级方向。

由于受限于灵敏度、分辨率或定量能力，现有众多方法不适于蛋白类药物单抗药物中亚微米(0.1-1μm)聚集体杂质检测，这导致了各国药典中亚微米聚集体杂质的检测方法标准空白，因此受到了行业内和监管机构的广泛关注。

在制药工业中，小于0.1μm的聚集体杂质通常用分子排阻色谱(size exclusionchromatography，SEC)测量，而大于100μm的肉眼察看即可。10-100μm的不溶性颗粒依据药典主要推荐光阻法(light obscuration，LO)测量，2-10μm虽无法规强制要求，但申报、放行时的微流照相法(micro-flow imaging，MFI)数据基本已是必不可少。真正的标准技术空白存在于0.1-2μm区间，虽然有DLS(测到的只是平均值，掩盖了样本的异质性)、场流(flowfield-flow fractionation，FFF)、分析超速离心(analytical ultracentrifugation，AUC)、纳米示踪(nanoparticle tracking analysis，NTA)、共振质量测量(Resonant massmeasurement，RMM)等技术提供数据，但由于生物大分子聚集体杂质折射率小、粒径范围宽、浓度波动大，这些技术受限于灵敏度、分辨率或定量能力，难以支撑形成标准和法规。