[发明专利]一种诊断标志物及其在COVID-19诊断及冠状病毒既往感染检测中的应用

权利要求书

1.一种COVID-19的诊断标志物，其特征在于，所述诊断标志物包括肽段COVID19-V003，所述肽段COVID19-V003的氨基酸序列为：包含HADQLTPTWRVYSTGSNV中5个及5个以上连续氨基酸的序列；或

所述肽段COVID19-V003的氨基酸序列为：包含HADQLTPTWRVYSTGSNV中1个到几个氨基酸的取代或/和缺失或/和添加所形成的序列。

2.根据权利要求1所述的COVID-19的诊断标志物，其特征在于，所述肽段的氨基酸序列为HADQLTPTWRVYSTGSNV，或包含氨基酸序列HADQLTPTWRVYSTGSNV中1个或几个氨基酸的缺失或突变所形成的序列。

3.一种用于COVID-19的诊断试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-2任一项所述的诊断标志物。

4.一种检测SARS-CoV-2病毒既往感染的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-2任一项所述的诊断标志物。

5.根据权利要求3或4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断标志物通过SMCC与BSA偶联，形成SMCC-BSA-肽偶联产物。

6.根据权利要求3或4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准品、包被缓冲液、封闭液、样品稀释液、终止液、酶标试剂、酶底物溶液和洗涤液。

7.根据权利要求3或4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述标准品包括抗诊断标志物(肽段COVID19-V003)的IgG抗体的浓度为0U/mL的标准血清1和抗诊断标志物(肽段COVID19-V003)的IgG抗体的浓度为100U/mL的标准血清2；所述标准血清1为正常人血清，标准血清2为COVID19-V003抗体为阳性的血清；

所述肽段COVID19-V003抗原采用包被缓冲液稀释，所述包被缓冲液为0.05±0.005M、pH 9.6±0.05的碳酸盐缓冲液，即每1L溶液中含1.59g Na₂CO₃，2.93g NaHCO₃；

所述封闭液为含3％牛血清白蛋白的0.01±0.005M、pH 7.4±0.05的磷酸盐-NaCl缓冲液(PBS)溶液，即每1L中含有5g牛血清白蛋白(BSA)，8g NaCl，0.2g KH₂PO₄，2.9g Na₂HPO₄·12H₂O，0.2g KCl。

8.根据权利要求3或4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述酶底物溶液包括：显色剂A：500mL溶液中含醋酸钠13.6g，柠檬酸1.6g，30％双氧水0.3mL；显色剂B：500mL溶液中含TMB350mg，DMSO 20mL，柠檬酸·H₂O 5.1g。

9.根据权利要求3或4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述标准品与待测血清样品采用样品稀释液进行稀释，所述样品稀释液为0.01M pH 7.4磷酸盐-NaCl缓冲液(PBS)；

所述洗涤采用的洗涤液为含0.05％Tween-20的、0.01±0.005M、pH 7.4±0.05磷酸盐-NaCl缓冲液(PBST)，即每1升溶液中含8g NaCl，0.2g KH₂PO₄，2.9g Na₂HPO₄·12H₂O，0.2gKCl，0.5mL Tween-20；

所述终止液为2±0.1M H₂SO₄溶液；

所述酶标试剂为含有辣根过氧化物酶标记的anti-Human IgG抗体的酶标试剂。

10.一种定性检测人血清中抗肽段COVID19-V003的IgG抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、将权利要求1所述的诊断标志物肽段COVID19-V003通过SMCC与BSA偶联；

B、将偶联后的肽段COVID19-V003通过稀释后包被在酶标板上的微孔内制成固相抗原，加入封闭液；

C、将标准品与待测血清样品稀释后加入各自的抗原测定孔中，温育后，每孔加入含有辣根过氧化物酶标记的anti-Human IgG抗体的酶标试剂，形成COVID19-V003-抗体-酶标二抗复合物；

D、经步骤C处理后，彻底洗涤，加酶底物溶液显色，然后加入终止液终止反应，通过OD₄₅₀值即得样品中抗肽COVID19-V003的IgG抗体的水平。