[发明专利]反义RNAch-MYC-AS1的FISH检测引物、试剂盒

权利要求书

1.一种反义RNA ch-MYC-AS1的FISH检测探针组，其特征在于，反义RNA ch-MYC-AS1的cDNA序列通过以下方法获得：

(1)鉴定ch-MYC-AS1的5′和3′末端序列；

由Takara公司提供的RACE 5’/3’Kit试剂盒来完成；

首先，用Reagent提取鸡巨噬细胞系HD11总RNA，然后用RNase-free DNase I去除基因组；在试剂盒提供的SMARTScribeReverse Transcriptase的作用下分别将1μg去除基因组的RNA逆转录合成5′-或3′-RACE产物；

然后，按照RACE 5’/3’Kit试剂盒的操作说明，利用通用引物UPM分别与5′-末端或3′-末端基因特异性引物gene-specific primer进行PCR扩增，克隆测序获得ch-MYC-AS1的5′末端和3′末端序列；其中，所用5′-末端或3′-末端基因特异性引物的核苷酸序列如下：

ch-MYC-AS1-5-race：

5′-TCAGAGGAGAACGACAAGAGGCGAACG-3′

ch-MYC-AS1-3-race：

5′-TCCTCCGCCTCAACTGCTCTTTCTCTG-3′

(2)常规PCR扩增ch-MYC-AS1产物；其中，所用引物ch-MYC-AS1-F和ch-MYC-AS1-R的核苷酸序列如下：

ch-MYC-AS1-F：5′-GATTCTAAGTGATGTCCAAG-3′

ch-MYC-AS1-R：5′-TTTTTCTTCCGACACGCC-3′

其反应体系包括：100ng鸡胚成纤维细胞cDNA产物作为模板，1μL上游引物ch-MYC-AS1-F与1μL ch-MYC-AS1-R分别作为扩增引物，1μL DNA Polymerase，10μL 5x SF Buffer，1μLdNTP Mix和32μL ddH₂O；

其反应条件为：95℃3min；95℃15s，58℃90s，72℃1min，35x循环；72℃7min；4℃维持；

(3)TA克隆测序获得ch-MYC-AS1的全长cDNA序列；

所述探针组由序列为SEQ ID NO.1-20所示的20条探针组成；其中：

SEQ ID NO.1：gtgcataggaactcttggac；

SEQ ID NO.2：cacaaccttgagcagctaag；

SEQ ID NO.3：gcggaggagagaacagttga；

SEQ ID NO.4：tcgcagagaaagagcagttg；

SEQ ID NO.5：caatcggacgagcacagact；

SEQ ID NO.6：cacggagtacgttctgtcta；

SEQ ID NO.7：ccaaggttgtcatcctgaaa；

SEQ ID NO.8：ggtggccaacaacgagaagg；

SEQ ID NO.9：tgaagctgagattctttgcc；

SEQ ID NO.10：acaagaggcgaacgcacgac；

SEQ ID NO.11：cacgttagactcagaggaga；

SEQ ID NO.12：caaccgaaaatgctccagtc；

SEQ ID NO.13：agggtcctcaaacagatcag；

SEQ ID NO.14：gccaagaggctaaagttgga；

SEQ ID NO.15：accaacacaactacgctgct；

SEQ ID NO.16：aagcggtgtcacgtcaacat；

SEQ ID NO.17：atcagaggagcactgtaagc；

SEQ ID NO.18：aacgagtctgaatccagcac；

SEQ ID NO.19：tcgatgtcgttacattagct；

SEQ ID NO.20：gcagcgactcggaagaagaa。

2.利用权利要求1所述的反义RNA ch-MYC-AS1的FISH检测探针组在制备反义RNA ch-MYC-AS1的FISH检测试剂盒中的应用。

3.一种反义RNA ch-MYC-AS1的FISH检测试剂盒，包括FISH探针、杂交液和染色液；其特征在于，所述FISH探针序列如SEQ ID NO.1-20示，分别为：

SEQ ID NO.1：gtgcataggaactcttggac；

SEQ ID NO.2：cacaaccttgagcagctaag；

SEQ ID NO.3：gcggaggagagaacagttga；

SEQ ID NO.4：tcgcagagaaagagcagttg；

SEQ ID NO.5：caatcggacgagcacagact；

SEQ ID NO.6：cacggagtacgttctgtcta；

SEQ ID NO.7：ccaaggttgtcatcctgaaa；

SEQ ID NO.8：ggtggccaacaacgagaagg；

SEQ ID NO.9：tgaagctgagattctttgcc；

SEQ ID NO.10：acaagaggcgaacgcacgac；

SEQ ID NO.11：cacgttagactcagaggaga；

SEQ ID NO.12：caaccgaaaatgctccagtc；

SEQ ID NO.13：agggtcctcaaacagatcag；

SEQ ID NO.14：gccaagaggctaaagttgga；

SEQ ID NO.15：accaacacaactacgctgct；

SEQ ID NO.16：aagcggtgtcacgtcaacat；

SEQ ID NO.17：atcagaggagcactgtaagc；

SEQ ID NO.18：aacgagtctgaatccagcac；

SEQ ID NO.19：tcgatgtcgttacattagct；

SEQ ID NO.20：gcagcgactcggaagaagaa。