[发明专利]一种多重纳米-荧光定量超敏规模化检测试剂盒

说明书

本发明属于动物病毒检测技术领域，涉及一种针对猪蓝耳病病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒的多重超敏纳米荧光检测试剂盒。本发明可同时对上述五种病毒进行筛查与鉴别，灵敏度为20copies/mL，实现了上述五种病原感染早期动物样品的规模化筛查与鉴别。本发明具有高通量、灵敏度高、特异性强、免除病原核酸提取和反转录等优点，可提高感染早期病原的检出率，有效防控这五类疾病的传播，对保障养猪业的健康发展具有重要意义。

技术领域

本发明涉及动物病毒检测技术领域，具体涉及一种能同时检测和鉴别诊断猪蓝耳病病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒和猪细小病病毒的多重纳米-荧光定量超敏规模化检测(UNDP-MFQ)试剂盒及富集探针、放大标签、检测探针和检测引物。

背景技术

养猪业是我国畜牧业的关键支柱产业，近年来随着集约化养猪业的发展，猪繁殖与呼吸障碍综合症(俗称蓝耳病)病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)等单独感染或混合感染所引起的母猪繁殖障碍性疾病和仔猪多系统病成为危害我国规模化养猪业的主要疫病，给生猪养殖业带来了巨大的经济损失，严重地制约了我国养猪业的健康发展。但是，针对这几类具有相似临床特征的病毒性疾病，目前还缺乏早期、快速、经济的筛查技术和规模化的鉴别诊断技术，导致对此类疾病的流行情况、病原的潜在感染情况缺乏系统性认识，进而无法进行及时有效的系统性防控。

目前我国境内常见的危害规模化养猪生产的猪繁殖障碍性病毒性疾病主要包括：PCV2和PRRSV混合感染引起的以妊娠母猪的繁殖障碍性疾病及各种年龄猪特别是仔猪的呼吸道疾病；PCV2和PPV引起的妊娠母猪流产、不孕或生产死胎；CSFV持续性感染引起的以母猪繁殖障碍为主要特征的非典型性猪瘟。在这些疾病中，PCV2感染以及其引起的免疫功能低下是上述各类病原感染并致病的最根本原因。PCV2的单感染对宿主没有较强的致病性影响，但是由于猪对其有较强的易感性，且PCV2感染引起猪免疫力下降，从而使机体更易感染其他病原，因此，PCV2感染猪更易于感染PPV、PRRSV、CSFV和PRV等病原，进而使这些病原的感染率和相关疾病的发病率显著升高。

猪繁殖与呼吸障碍综合症(俗称蓝耳病)病毒(PRRSV)能引起猪的繁殖和呼吸系统综合征(PRRS)。不同年龄、品种和性别的猪均易感染，该病主要以母猪发热、厌食和流产、死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征。高致病性猪蓝耳病是由PRRSV变异株引起的一种急性高致病性传染病，仔猪发病率达100％、死亡率达50％以上，母猪流产率达30％以上。由于高致病性PRRSV毒力强、传播速度快、发病率高、病死率高，到目前为止，蓝耳病已蔓延到全球，每年都有巨大的经济损失，对养猪业构成了严重的威胁。

猪瘟病毒(CSFV)黄病毒科瘟病毒属成员，基因组为单股正链RNA，长度为12.3kb，其引起的猪瘟被国际兽疫局列为A类传染病。近年来猪瘟疫苗的广泛使用已经基本上抑制了烈性猪瘟的发生，但是，猪瘟病毒所致疾病正呈现出慢性化的特征，感染猪主要表现为母猪流产、产木乃伊胎、死胎和产弱仔，进而给该病的防控带来了新的困难。

猪圆环病毒2型(PCV2)属于圆环病毒科，圆环病毒属，病毒直径约17nm，无囊膜，是迄今被发现的最小的脊椎动物病毒。该病毒基因组是单链环状DNA，全长约1.7kb。PCV2感染可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)和猪繁殖障碍等多种疾病，PCV2感染会使10～15周龄仔猪出现体重减轻、腹泻、黄疸等临床表现。虽然单纯PCV2感染很少引起严重的临床疾病，但它通常会与其他病原形成混合感染，造成圆环病毒相关疾病(PCVAD)，给养猪业带来巨大损失。