[发明专利]丹参-三七药对的质量检测方法

权利要求书

1.一种丹参-三七药对的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤（1）对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的丹酚酸A，丹酚酸B，丹酚酸C，紫草酸，咖啡酸，丹参素，迷迭香酸，原儿茶酸，原儿茶醛，人参皂苷Rb1，Rb2，Rc，Rd，Re，Rg1，Rg2，Rf，F1，F2，Rh1，三七皂苷R1，R2，Fe，加甲醇制成混合标准储备溶液，4°C保存；

步骤（2）供试品溶液的制备

取丹参加乙醇加热回流提取，提取液滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，备用；再取丹参药渣加乙醇水溶液加热回流提取，提取液滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，备用；药渣再加水煎煮2小时，煎液滤过，滤液浓缩至适量；合并三次提取的浓缩物；

取三七粉碎成细粉，将三七粉末与上述丹参浓缩物混合均匀，得到丹参-三七提取物；

精密称取丹参-三七提取物冻干粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇水溶液，密塞，称定重量，超声提取，放冷，再称定重量，用甲醇水溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，取续滤液，进样之前过微孔滤膜；

步骤（3）线性回归方程的建立

取步骤（1）的混合标准储备溶液，依次稀释5倍，通过0.22μm纤维素膜过滤，得到系列浓度的混合对照品溶液，依次注入UPLC-TQ-MS/MS，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；

步骤（4）含量测定

取步骤（2）的丹参-三七药对供试品溶液，注入UPLC-TQ-MS/MS进行分析，将峰面积代入步骤（3）的线性回归方程，计算供试品溶液中酚酸类和皂苷类成分的含量;

所述的步骤（3）和步骤（4）中的UPLC-TQ-MS/MS的色谱条件为：

色谱柱：UPLC BEH C18柱，规格100 ×2.1 mm，1.7 μm，美国Waters公司；柱温：35℃，样品温度：4℃；流速：0.40 mL/min；进样：1μL；流动相A为0.1%甲酸水，B为乙腈；梯度洗脱：0~1min 8%B，1~6 min 8→38%B，6~7.5 min 38→85%B，7.5~8 min 85→90%B，8~8.5 min 90%B，8.5~9 min 90→8%B，9~10 min 8%B；

质谱条件：在负离子模式下，采用ESI操作，质谱参数设置如下：毛细管电压2.5 kV，去溶剂化温度450°C，离子源温度150°C，锥孔气体流量150 L/h，去溶剂化气体流量1000 L/h，雾化7.0 Bar；

23种对照品质谱条件如下表：

化合物	保留时间/min	前体离子/m/z	产物离子/m/z	锥孔电压/V	碰撞能量/eV
原儿茶酸	1.48	152.6	108.9	6	13
原儿茶醛	2.24	136.6	108.1	34	18
咖啡酸	2.74	178.7	135.0	16	15
丹参素	1.23	196.8	178.8	20	10
迷迭香酸	4.61	359.1	161.0	34	16
丹酚酸A	5.24	493.3	295.1	24	16
丹酚酸B	4.89	717.3	519.2	22	18
丹酚酸C	5.97	491.2	293.1	34	20
紫草酸	4.66	537.3	493.2	12	10
人参皂苷Rb1	6.50	1153.7	1107.8	24	36
人参皂苷Rb2	6.61	1123.7	1077.7	46	26
人参皂苷Rc	6.44	1123.7	1077.7	46	26
人参皂苷Rd	7.01	991.7	945.7	50	32
人参皂苷Re	5.01	991.7	945.7	50	32
人参皂苷Rg1	5.02	845.6	799.6	52	26
人参皂苷Rf	6.39	845.6	799.6	6	22
人参皂苷F2	7.46	829.6	783.6	40	20
人参皂苷Rg2	6.77	829.6	783.6	24	20
人参皂苷F1	7.06	683.6	637.6	38	18
人参皂苷Rh1	6.84	683.6	637.5	26	22
三七皂苷R1	4.80	977.7	931.7	42	22
三七皂苷Fe	7.20	961.7	915.7	18	22
三七皂苷R2	6.58	815.6	769.6	38	22

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