[发明专利]抗EB病毒LMP1的单克隆抗体及其细胞株和应用

说明书

本发明公开了抗EB病毒LMP1的单克隆抗体及其细胞株和应用，本发明以SEQ ID NO.2的序列为抗原采用细胞融合得到细胞株，经过三轮亚克隆挑选，结合间接ELISA及FACS检测技术，最终筛选出可稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株，扩大培养，细胞上清经亚型鉴定结果显示均为单一亚型；FACS检测结果较好的细胞7B63B10制备腹水并纯化出抗体。分泌的抗体具有高特异性和高亲和力，而且建立的间接ELISA方法具有很好的检测特异性和灵敏度，说明本发明双抗体间接ELISA试剂盒具有很好的推广应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及抗EB病毒LMP1的单克隆抗体及其细胞株和应用。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是一种DNA病毒，属于人类4型疱疹病毒(HHV-4)，是首个与人类肿瘤直接关联的病毒。据统计，全世界超过90％的人类均感染过此病毒，原发感染后可终身携带，由此会产生多种疾病：Burkitt淋巴瘤(BL)、鼻咽癌(NPC)、霍奇金淋巴瘤(HL)、移植后淋巴增殖性疾病(PTLD)、EBV相关性胃癌(EBVaGC)等。

LMP1(Latent membrane protein 1，LMP1，潜伏膜蛋白1)是导致B细胞永生化的关键蛋白之一。它是一种EBV编码的膜蛋白，分子量为66KDa，由386个氨基酸(aa)组成，包含亲水性胞浆N端(1-23aa)、6个输水跨膜区(24-186aa)以及由200个氨基酸组成的C端(187-386aa)；C端包含三个重要的C末端激活结构域(C terminal activating regions，CTARs)：CTAR1、CTAR2和CTAR3。这些区域为适配子蛋白提供了锚定位点，包括肿瘤坏死因子受体相关因子(TNFR-associated factors，TRAFs)、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域蛋白(TNFR-associated death domain，TRADD)、受体相互作用蛋白激酶(Receptorinteracting protein kinase，RIP)、BS69、JAK-3蛋白等，通过NF-κB、JNK/p38-SAPK、PI3-K/Akt、ERK-MAPK和JAK/STAT通路转导信号，介导了细胞永生化、抑制细胞分化和凋亡、促进肿瘤转移、逃避宿主免疫反应等。

因此找到一种能稳定分泌、特异结合抗LMP1单克隆抗体的细胞株，成为亟需解决的问题，对于EB病毒LMP1深层次的分子机制具有重要的意义。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种分泌抗LMP1单克隆抗体的细胞株。

本发明的另一目的在于提供上述细胞株分泌的单克隆抗体。

本发明的再一目的在于提供上述细胞株和单克隆抗体的应用。

为达到上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提出了一种分泌抗LMP1单克隆抗体的杂交瘤细胞株7B63B10于2019年7月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，中国武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2019160。

本发明的第二个方面，提出了一种抗LMP1单克隆抗体，该单克隆抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

根据本发明的实施例，所述单克隆抗体的重链可变区的基因序列如SEQ ID NO.4所示，轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.6所示。

根据本发明的实施例，所述单克隆抗体具有高度特异性，用于特异性识别LMP1。

根据本发明的实施例，所述单克隆抗体的Ig型为IgG2b。

前面所述单克隆抗体是由前面所述的杂交瘤细胞株7B63B10分泌产生。