[发明专利]抗EB病毒LMP2A的单克隆抗体及其细胞株和应用

说明书

本发明公开了抗EB病毒LMP2A的单克隆抗体及其细胞株和应用，本发明以SEQ ID NO.2序列为抗原采用细胞融合得到细胞株，经过三轮亚克隆挑选，结合间接ELISA及FACS检测技术，最终筛选出可稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株，扩大培养，细胞上清经亚型鉴定结果显示均为单一亚型；FACS检测结果较好的细胞6A46D2制备腹水并纯化出抗体。分泌的抗体具有高特异性和高亲和力，而且建立的间接ELISA方法具有很好的检测特异性和灵敏度，说明本发明双抗体间接ELISA试剂盒具有很好的推广应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及抗EB病毒LMP2A的单克隆抗体及其细胞株和应用。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是一种DNA病毒，属于人类4型疱疹病毒(HHV-4)，是首个与人类肿瘤直接关联的病毒。据统计，全世界超过90％的人感染过该病毒，原发感染后可终身携带，由此会产生多种疾病：Burkitt淋巴瘤(BL)、鼻咽癌(NPC)、霍奇金淋巴瘤(HL)、移植后淋巴增殖性疾病(PTLD)、EBV相关性胃癌(EBVaGC)等。

LMP2A(Latent membrane protein 2A，LMP2A，潜伏膜蛋白2A)，是EB病毒编码的膜蛋白，已有文献报道LMP2A在超过50％鼻咽癌病例中表达。LMP2A蛋白分子量54kD，由496个氨基酸组成，包括12个跨膜区。LMP2A的表达可以感染BCR的信号和功能，促进淋巴瘤的发生；LMP2A也可通过PI3K/Akt、NF-κB、STAT等通路，介导上皮细胞转化和B细胞存活，在B细胞、淋巴细胞、胃癌和鼻咽癌等细胞中增强细胞的存活、抗凋亡等恶性表型。

因此找到一种能稳定分泌、特异结合抗LMP2A单克隆抗体的细胞株，成为亟需解决的问题，对于EB病毒LMP2A深层次的分子机制具有重要的意义。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种分泌抗LMP2A单克隆抗体的细胞株。

本发明的另一目的在于提供上述细胞株分泌的单克隆抗体。

本发明的再一目的在于提供上述细胞株和单克隆抗体的应用。

为达到上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提出了一种分泌抗LMP2A单克隆抗体的杂交瘤细胞株6A46D2于2019年7月19日保藏于中国典型培养物保藏中心中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2019172。

本发明的第二个方面，提出了一种抗LMP2A单克隆抗体，该单克隆抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

根据本发明的实施例，前面所述单克隆抗体的重链可变区的基因序列如SEQ IDNO.4所示，轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.6所示。

根据本发明的实施例，前面所述单克隆抗体的Ig型为IgG2a。

根据本发明的实施例，所述单克隆抗体具有高度特异性，用于特异性识别LMP2A。

前面所述单克隆抗体是由前面所述的杂交瘤细胞株分泌产生。

本发明的第三个方面，提出了一种检测EB病毒的LMP2A的试剂盒，该试剂盒中含有前面所述的抗LMP2A单克隆抗体。

本发明的第四个方面，提出了杂交瘤细胞株6A46D2在制备抗LMP2A单克隆抗体中的应用。根据本发明的实施例，所述单克隆抗体可用于特异性识别LMP2A；所述单克隆抗体的重链可变区具有序列表中SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列；轻链可变区具有序列表中SEQID NO.7所示的氨基酸序列。

本发明的第五个方面，提出了一种检测EB病毒LMP2A的试剂盒，所述试剂盒中含有前面任一所述的单克隆抗体。