[发明专利]一种聚乙烯及PBAT塑料地膜高效降解菌及其应用

权利要求书

1.一种聚乙烯及PBAT塑料地膜降解菌，其特征在于：所述聚乙烯及PBAT塑料地膜降解菌是Pseudomonas knackmussii N1-2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO: M 20191053；保藏时间为2019年12月16日。

2.一种如权利要求1所述的聚乙烯及PBAT塑料地膜降解菌在降解聚乙烯塑料地膜中的应用。

3.一种如权利要求1所述的聚乙烯及PBAT塑料地膜降解菌在降解PBAT塑料地膜中的应用。

4.一种基于权利要求1所述的聚乙烯及PBAT塑料地膜降解菌降解聚乙烯塑料地膜的方法，其特征在于：所述方法包括：

1）将聚乙烯塑料地膜剪成膜片，进行无菌处理；

1.1）将膜片用2%SDS溶液浸泡，浸泡时间不低于4小时，浸泡期间超声30 min；

1.2）将步骤1.1）浸泡的膜片再用30%双氧水浸泡10 min；

1.3）将步骤1.2）浸泡后的膜片，依次用75%乙醇和95%乙醇浸泡，浸泡时间不低于4小时，浸泡期间超声30 min；

2）将权利要求1所述的聚乙烯及PBAT塑料地膜降解菌接种至LB培养基中培养至对数生长期，转入离心管离心，去掉上清液，将沉淀菌体用0.01 mol/L磷酸盐缓冲溶液洗涤；

3）将30mL无机盐培养基和步骤2）的沉淀菌体混合，重悬并调节菌液浓度，保持菌液的OD₆₀₀值为0.8~1.0；

4）向步骤3）的菌液中加入步骤1）灭菌处理的膜片，放置于恒温震荡培养箱中28℃、180rpm培养8周。

5.一种基于权利要求1所述的聚乙烯及PBAT塑料地膜降解菌降解PBAT塑料地膜的方法，其特征在于：所述方法包括：

1）将PBAT塑料地膜剪成膜片，进行无菌处理；

1.1）将膜片用2%SDS溶液浸泡，浸泡时间不低于4小时，浸泡期间超声30 min；

1.2）将步骤1.1）浸泡的膜片再用30%双氧水浸泡10 min；

1.3）将步骤1.2）浸泡后的膜片，依次用75%乙醇和95%乙醇浸泡，浸泡时间不低于4小时，浸泡期间超声30 min；

2）将权利要求1所述的聚乙烯及PBAT塑料地膜降解菌接种至LB培养基中培养至对数生长期，转入离心管离心，去掉上清液，将沉淀菌体用0.01 mol/L磷酸盐缓冲溶液洗涤；

3）将30mL无机盐培养基和步骤2）的沉淀菌体混合，重悬并调节菌液浓度，保持菌液的OD₆₀₀值为0.8~1.0；

4）向步骤3）的菌液中加入步骤1）灭菌处理的膜片，放置于恒温震荡培养箱中28℃、180rpm培养8周。