[发明专利]一种大花序桉1203品种的组培快繁方法

权利要求书

1.一种大花序桉1203品种的组培快繁方法，其特征在于：采用大花序桉优良种源的优良单株，对其进行伐倒促萌，采集芽条诱导无菌芽，经过对无菌芽的继代培养、生根培养以及容器育苗，获得再生植株；

所述的大花序桉1203品种的组培快繁方法，具体包括如下步骤：

（1）外植体建立：从澳大利亚引种的大花序桉优良种源林分中筛选优良单株，从30cm处伐倒促萌，选择健壮半木质化萌芽条，用水浸泡带回实验室，去除顶端幼嫩部分和叶片，剪成3-5cm的茎段，用自来水冲洗35-45min，再用饱和洗衣粉溶液洗涤13-15min，而后用自来水冲洗干净；

（2）外植体消毒：将步骤（1）得到的外植体置于高压灭菌处理过的广口瓶中，倒入体积浓度75%的酒精溶液浸泡20s，倒掉酒精用无菌水清洗2-3次，置于10%次氯酸钠溶液中并适当搅拌，消毒20-22min，倒去次氯酸钠溶液，用无菌水清洗3-4次；

（3）无菌芽诱导：将消毒处理的外植体置于高压灭菌处理的接种碟上，使用灭菌处理的镊子、手术刀将接触药液的芽条两端切口切除，而后把芽条切成长度1-2cm的带芽茎段，接种到以试管为载体的诱导培养基上；棉布袋包裹后置于冰箱中4-8℃下暗培养7天，而后拿出插入试管架见光培养，光照强度2000-2500lux，温度25±2℃，培养25-30天；

（4）继代培养：当无菌萌芽长到1cm以上，选取无污染的无菌芽，用镊子从试管抽出外植体，切割后将无菌芽转入以广口瓶为载体的继代增殖培养基中，全光培养光照强度1500-2000lux，培养7-10天，增大光照强度至2000-3000lux，以促进丛芽增殖和生长，当丛生芽长到1-2cm时，转瓶到新的增殖培养基上继代培养，获取大量继代苗；

（5）生根培养：当继代苗达到一定量后，开始生根培养；剪取1.0-1.2cm的顶芽接入生根培养基中培养，培养温度25±2℃；

（6）炼苗：在培养室培养10天后，切口冒出根点或短根，将生根瓶苗捡出，转移到大棚炼苗；炼苗20-30天，使芽苗适应自然光照和昼夜温差，使之成为成熟的生根苗；炼苗过程中控制光照强度8000Lx～10000 Lx和环境温度25℃～30℃，避免强光和高温灼伤芽苗；

（7）移栽：炼苗25-30天，根长至1-3cm，苗高3cm以上，洗去培养基，移栽至0.5%高锰酸钾溶液消毒过的营养杯中，培养88-95天，得到再生植株；

（8）移栽后肥料管理：苗木移入营养杯14-16天进行施肥，用质量浓度0.2%的复合肥水溶液喷叶面，喷完立即用清水清洗苗木；每隔7天喷1次，遇到低温或雨天可延长；随苗木的生长，当苗高达到12-13公分，可加大施肥浓度，并可适当增加钾肥的用量，促进苗木木质化，待苗高达20公分时，停止施肥。

2.根据权利要求1所述的大花序桉1203品种的组培快繁方法，其特征在于：从澳大利亚引种的大花序桉优良种源，通过栽培试验、测定分析，经过测量胸径、树高、蓄积、连年生长量、木材材性以及干形指标，综合对比后，在适合本地生长的种源中选择优树。

3.根据权利要求1所述的大花序桉1203品种的组培快繁方法，其特征在于：步骤（3）无菌芽诱导中，所述的诱导培养基为：改良MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.4mg/L+L-半胱氨酸2.0mg/L+核黄素15mg/L+蔗糖30g/L+琼脂 4g/L，pH5.8-6.2。

4.根据权利要求1所述的大花序桉1203品种的组培快繁方法，其特征在于：步骤（4）继代培养中，所述的继代增殖培养基为：改良MS+6-BA0.8mg/L +NAA 0.3mg/L+核黄素12mg/L+蔗糖30g/L+琼脂 4g/L，pH5.8-6.2。

5.根据权利要求1所述的大花序桉1203品种的组培快繁方法，其特征在于：步骤（5）生根培养中，所述的生根培养基为：1/2改良MS+ABT₁2.0mg/L +IAA 2.0mg/L+维生素C 5mg/L+活性炭20mg/L+蔗糖15g/L+琼脂 4g/L，pH5.8-6.2。