[发明专利]根际假河杆菌、其培养分离方法和在烟草加香中的用途

说明书

本发明公开了根际假河杆菌(Pseudorivibacter rhizosphaerae)C1‑9，其16S rDNA部分序列如序列表所示，其保藏编号为CGMCC NO:1.13864。本发明还公开了所述根际假河杆菌(Pseudorivibacter rhizosphaerae)C1‑9培养分离方法和制备烟用香料的方法。本发明的根际假河杆菌为新的菌株，用其制备得到的烟用香料用于卷烟加香中，烟气的烟香丰富性显著增加，增加了烟气的细腻性，刺激性降低。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及根际假河杆菌、其分离方法和在烟草加香中的用途。

背景技术

香精香料在食品、饲料、化妆品、化工和制药等工业上具有重要地位，其来源主要包括天然与化学合成两种方式。其中，化学合成的香精香料约占整个产品的85％，但化学合成的方法具有副产物多、产率低、高成本、污染环境等缺点。随着绿色工业的倡导，天然香精香料越来越被人们所重视。天然香精香料主要来源于动物和植物，但动物、植物香料资源有限，提取成本高，远远满足不了日益增长的市场需求。

烟草行业是重要的消费品制造行业，通过降焦减害以提高卷烟的安全性已成为烟草行业的共同目标。但随着降低卷烟焦油量的下降，卷烟香气成分不足的问题也越发凸显。为弥补卷烟香气和吃味的不足，添加烟用香精香料成为完善卷烟产品风格的决定性因素和提高卷烟香气质量的一个有效手段。获取风格特征各异、且具有良好安全性能的烟用香精香料也成为了烟草制品研发的重要方向之一。

烟草香精香料按照来源，分为来自烟草本身的香精香料、非烟草的天然香精香料和人工合成的香精香料。通过微生物制备的天然香料是近年来新兴的烟用香料来源之一。微生物制备的香料是以天然原料为起始物，使用发酵技术、酶技术等产生的香料，也属于天然香料；由于微生物制备的香料具有生产周期短，不受气候影响，反应条件温和，产品分离后形成的“三废”少，对环境友好等多种优越性，使其逐渐成为产香植物的替代者。目前，通过微生物制备的烟用香料包括香兰素、2-苯乙醇、类胡萝卜素降解香料、多糖类及其他复合香料等。微生物制备香料具有原料易得，条件温和、选择性高等优势。但目前能用的制备香料的微生物的优势菌株种类并不多，所以筛选并开发应用新种类的产香微生物，以满足烟用香精香料研发和生产需求，具有现实的必要性。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种新的菌株根际假河杆菌、其培养分离和鉴别方法；本发明的目的还在于提供所述的根际假河杆菌在烟草加香中的用途。

本发明通过以下技术方案实现上述目的。

除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

本发明的技术方案如下：

本发明第一方面公开了根际假河杆菌(Pseudorivibacter rhizosphaerae)C1-9，其16S rDNA部分序列如序列表所示，其保藏编号为CGMCC NO:1.13864。

本发明第二方面公开了所述的根际假河杆菌C1-9培养分离的方法，包括以下步骤：

①从自然环境中取土壤样品，加无菌水，摇床振荡，加无菌水继续稀释并涂布于R2A平板培养基上进行培养，挑选单菌落，纯化，得到分离的微生物菌液，加入甘油、置于冰箱中备用；

②将步骤①分离的微生物菌液接种到R2A液体培养基中，摇床振荡，培养至菌液浓度为光密度OD＝2.0，制得种子液；

③将步骤②制得的每一待测菌株的种子液接种在筛选培养基中，摇床振荡，通过观察发酵液外观和香气变化情况，筛选能产生香气的微生物，即为根际假河杆菌(Pseudorivibacter rhizosphaerae)C1-9。

优选地，步骤③中所述筛选培养基的配方为：在R2A液体培养基的基础上添加0.1g/L的类胡萝卜素。