[发明专利]一种检测膳食纤维对人肠道菌活性影响的方法

权利要求书

1.一种检测膳食纤维对人肠道菌活性影响的方法，其特征在于：包括对拟杆菌的检测，具体步骤如下：

步骤一、拟杆菌培养基的配制：100mM KH₂PO₄(pH 7.2)，15mM NaCl，8.5mM (NH₄)₂SO₄，4mM L-半胱氨酸，1.9μM氯化血红素，200μM L-组氨酸，100nM MgCl₂，1.4nM FeSO₄·7H₂O，50μM CaCl₂，1μg/mL维生素K₃，5ng/mL维生素B₁₂；

步骤二、培养拟杆菌至其达到对数生长期并收集，使用拟杆菌培养基洗涤收集的拟杆菌，再用拟杆菌培养基将拟杆菌菌液浓度稀释至OD₆₀₀值为0.2～0.23；

步骤三、在96孔板中，每孔分别加入100μL稀释后的拟杆菌菌液和100μL膳食纤维溶液，使最终每孔中菌体浓度为OD600为0.09～0.11；然后在37℃恒温厌氧培养箱中培养72h，并记录每12h的OD₆₀₀值；

步骤四、根据每个时间点记录的拟杆菌的OD₆₀₀值，绘制拟杆菌在膳食纤维作用下的生长曲线。

2.根据权利要求1所述的一种检测膳食纤维对人肠道菌活性影响的方法，其特征在于：步骤二中培养拟杆菌的具体步骤是：使用含有5％胎牛血清的TSB培养基复苏冻存于-80℃的拟杆菌，在厌氧培养箱中培养24h，厌氧箱条件为：10％CO₂，10％H₂，80％N₂。

3.根据权利要求2所述的一种检测膳食纤维对人肠道菌活性影响的方法，其特征在于：所述拟杆菌包括多形拟杆菌、卵形拟杆菌、脆弱拟杆菌和解纤维素拟杆菌中的至少一种。

4.根据权利要求1～3任一项所述的一种检测膳食纤维对人肠道菌活性影响的方法，其特征在于：还包括对益生菌的检测，具体步骤如下：

步骤一、益生菌培养基的配制：细菌蛋白胨6.5g/L，大豆蛋白胨5.0g/L，胰蛋白胨2.5g/L，酵母提取物3.0g/L，KCl 2.0g/L，NaHCO₃ 0.2g/L，NaCl 4.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，CaCl₂·2H₂O 0.45g/L，MnSO₄·H₂O 0.2g/L，FeSO₄·7H₂O 0.005g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.005g/L，L-半胱氨酸0.4g/L，氯化血红素0.005g/L，维生素K₃ 0.005g/L；

步骤二、培养益生菌至其达到对数生长期并收集，使用益生菌培养基洗涤收集的益生菌，再用益生菌培养基将益生菌菌液浓度稀释至OD₆₀₀值为0.2～0.23；

步骤三、在96孔板中，每孔分别加入100μL稀释后的益生菌菌液和100μL膳食纤维溶液，使最终每孔中菌体浓度为OD600为0.09～0.11；然后在37℃恒温厌氧培养箱中培养72h，并记录每12h的OD₆₀₀值；

步骤四、根据每个时间点记录的拟杆菌的OD₆₀₀值，绘制拟杆菌在膳食纤维作用下的生长曲线。

5.根据权利要求4所述的一种检测膳食纤维对人肠道菌活性影响的方法，其特征在于：步骤二中培养益生菌的具体步骤是：使用MRS培养基复苏冻存于-80℃的益生菌直至其生长达到对数生长期。

6.根据权利要求5所述的一种检测膳食纤维对人肠道菌活性影响的方法，其特征在于：所述益生菌包括长双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和罗伊氏乳杆菌中的至少一种。