[发明专利]一种提升高产脂马尾松优树继代芽生根稳定性的方法

权利要求书

1.一种提升高产脂马尾松优树继代芽生根稳定性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）继代芽的培养：采集成年马尾松高产脂优株的当年新梢进行嫁接，对嫁接苗进行截顶促萌处理，然后以幼化萌芽条为外植体进行无菌接种、初始芽诱导和继代增殖培养，获得马尾松继代芽，所述继代增殖培养的时间为1.5~2年；

（2）生根预处理：无菌条件下，截取步骤（1）所述的马尾松继代芽的顶芽转入培养基Ⅰ中，于弱光条件下培养，所述弱光条件下培养的温度为8~14℃，所述弱光条件下培养的光照强度为0~5 μmol·m^-2·s^-1，所述弱光条件下培养的时间为5~7d；所述培养基Ⅰ的原料组成包括缩节胺、多效唑、α-萘乙酸、亚硒酸钠、还原型谷胱甘肽、海藻糖、蔗糖和改良MS培养基；

（3）生根诱导：将步骤（2）生根预处理后的材料，放置在光照条件下培养，所述光照条件下培养的温度为20℃，所述光照条件下培养的光照强度为10~20 μmol·m^-2·s^-1，所述光照条件下培养的时间为10d；

（4）根系伸长：在步骤（3）完成后，将继代芽转入培养基Ⅱ中，于光照条件下培养，获得马尾松生根苗，所述光照条件下培养的温度为26℃，所述光照条件下培养的光照强度为40μmol·m^-2·s^-1，所述光照条件下培养的时间为10d，所述培养基Ⅱ的原料组成包括GA₁、GA₃、GA₄、吲哚乙酸、吲哚丁酸、抗坏血酸、维生素、蔗糖和改良MS培养基；

所述改良MS培养基的原料组成包括KNO₃、NH₄Cl、CaCl₂·2H₂O、MgSO₄·7H₂O、K₂SO₄、NaH₂PO₄·2H₂O、FeSO₄·7H₂O、Na₂EDTA、MnSO₄·H₂O、ZnSO₄·7H₂O、CuSO₄·5H₂O、H₃BO₃、Na₂MoO₄·2H₂O、KI、CoCl₂·6H₂O、维生素B₁、维生素B₆、烟酸和肌醇，所述改良MS培养基的各原料含量为：KNO₃ 909.90 mg·L^-1、NH₄Cl 53.49 mg·L^-1、CaCl₂·2H₂O 73.51 mg·L^-1、MgSO₄·7H₂O 123.24 mg·L^-1、K₂SO₄ 130.68 mg·L^-1、NaH₂PO₄·2H₂O 234.02 mg·L^-1、FeSO₄·7H₂O 15 mg·L^-1、Na₂EDTA 20 mg·L^-1、MnSO₄·H₂O 30 mg·L^-1、ZnSO₄·7H₂O 2mg·L^-1、CuSO₄·5H₂O 0.2 mg·L^-1、H₃BO₃ 10 mg·L^-1、Na₂MoO₄·2H₂O 0.2 mg·L^-1、KI 0.5mg·L^-1、CoCl₂·6H₂O 0.13 mg·L^-1、维生素B₁ 1.0 mg·L^-1、维生素B₆ 0.5 mg·L^-1、烟酸0.5 mg·L^-1、肌醇500 mg·L^-1；

所述培养基Ⅰ的各原料含量为：缩节胺15 µmol·L^-1、多效唑3 µmol·L^-1、α-萘乙酸2.5µmol·L^-1、亚硒酸钠20~30 mg·L^-1、还原型谷胱甘肽25 mg·L^-1、海藻糖3 g·L^-1、蔗糖10g·L^-1和1/2改良MS培养基；1/2改良MS培养基原料组成包括KNO₃、NH₄Cl、CaCl₂·2H₂O、MgSO₄·7H₂O、K₂SO₄、NaH₂PO₄·2H₂O、FeSO₄·7H₂O、Na₂EDTA、MnSO₄·H₂O、ZnSO₄·7H₂O、CuSO₄·5H₂O、H₃BO₃、Na₂MoO₄·2H₂O、KI、CoCl₂·6H₂O、维生素B₁、维生素B₆、烟酸和肌醇，1/2改良MS培养基的各原料含量为所述改良MS培养基的二分之一；

所述培养基Ⅱ各原料含量为：GA₁ 12 µmol·L^-1、GA₃ 10 µmol·L^-1、GA₄ 8 µmol·L^-1、吲哚乙酸8~12 µmol·L^-1、吲哚丁酸5~15 µmol·L^-1、抗坏血酸1 mg·L^-1、维生素E 4 mg·L^-1、蔗糖25~30 g·L^-1和1/2改良MS培养基。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述嫁接为本砧嫁接。