[发明专利]一种表达体液免疫疫苗mRNA的质粒载体及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 202010426667.3 | 申请日： | 2020-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN111607612A | 公开（公告）日： | 2020-09-01 |
| 发明（设计）人： | 潘有东;宋麒;王奕;肖安;万季;刘刚;文颖 | 申请（专利权）人： | 深圳市新合生物医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京冠和权律师事务所 11399 | 代理人： | 陈国军 |
| 地址： | 518055 广东省深圳市南*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 体液 免疫 疫苗 mrna 质粒 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种表达体液免疫疫苗mRNA的质粒载体，包括B抗原表位表达、定位所需元件的区段和长度大于30的多聚腺苷脱氧核酸poly A片段。
2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述B抗原表位表达、定位所需元件的区段包括XbaI位点粘性末端、T7 RNA聚合酶识别片段、来自HBB基因的5’-UTR、IGHE蛋白的信号肽序列、BamHI位点、编码2019-nCoV E蛋白的可移除序列、SacI位点、来自HBB的3’-UTR序列、XhoI位点粘性末端。
3.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于，所述多聚腺苷脱氧核酸poly A片段的长度为60。
4.根据权利要求1-3任一所述的载体，其特征在于，还包括pNeoCura-Exp060载体中除了长度为30的可替换区段及Xhol和Xbal之间序列以外的其它序列。
5.根据权利要求1-4任一所述的载体，其特征在于，还包括启动子序列。
6.根据权利要求1-5任一所述的载体，其特征在于，所述启动子序列为T7。
7.一种根据权利要求1-6任一所述的表达体液免疫疫苗mRNA的质粒载体的构建方法，包括以下步骤：
S01，使用限制性内切酶XbaI和XhoI将pNeoCura-Exp060载体中长度为30的区段移除；
S02，并连接插入一段带有XbaI位点粘性末端、T7 RNA聚合酶识别片段、来自HBB基因的5’-UTR、IGHE蛋白的信号肽序列、BamHI位点、编码2019-nCoV E蛋白的可移除序列、SacI位点、来自HBB的3’-UTR序列、XhoI位点粘性末端的人工合成序列，构建为pNeoCura-BVac质粒载体。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S11，酶切pNeoCura-Exp060质粒并回收长片段；
S12，合成携带有pNeoCura-BVac载体特定插入片段的序列；
S13，连接为pNeoCura-BVac载体。
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