[发明专利]用于鼻咽癌筛查的方法和装置

说明书

公开了用于鼻咽癌筛查的方法和装置。所述方法包括提供来自于受试者的鼻咽样品，从所述样品分离DNA，使用实时PCR由所述DNA扩增并检测至少一个EBV靶序列，其中小于或等于31.5的实时PCR循环阈值次数表明所述受试者有鼻咽癌或发展鼻咽癌的风险。用于获得刷拭活检样品的装置包括具有第一端和第二端的纵轴，其中至少两个刷头从所述轴的第二端延伸。

本申请为2014年10月3日提交的，发明名称为“用于鼻咽癌筛查的方法和装置”，申请号为2014800574061的专利申请的分案申请。

相关申请案的交叉引用

本申请要求保护2013年10月4日提交的美国临时申请第 61/886,807号的优先权的权益，其内容通过引用整体并入本文。

技术领域

本公开涉及用于筛查鼻咽癌的方法、组合物和装置。

发明背景

鼻咽癌症(NPC)是流行地区如太平洋和地中海沿岸国家及亚北极地区中年受试者高度流行的恶性肿瘤。NPC是中国南方因病死亡的主要原因。遗传和环境因素促成肿瘤风险，并且在NPC流行区的高发病率和高人口密度使得NPC成为全球的常见癌症。估计全球的高危人群为13-15亿人。每年在北美约有500个新病例，在香港和台湾有5000个病例并且全世界有100,000个病例(Ung1999)。NPC因为其与人γ疱疹病毒4、爱波斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr Virus)(EBV) 密切、接近绝对的关联，所以是不常见的癌症，每个肿瘤细胞隐匿多个拷贝的在早期、侵袭前病变中已经可检测的相同病毒克隆 (Pathmanathan1995)。NPC出现在鼻后远侧空间，这里NPC可发展很少症状，并且在转移组织中首次诊出并不罕见，因此预后不良 (Skinner1990；Ho1998)。尽管在相关人口中发病率和意识越来越高，但是NPC的现实仍受后期诊断而控制，通常通过鼻咽镜检查，在早期检测到的肿瘤预后良好(Liu1998)。

数十年来，EBV和NPC之间的密切关联已经吸引了为改进对 NPC风险的临床诊断的尝试。Raab-Traub(1987)证明所有组织学子集的NPC均含EBV DNA。虽然EBV血清学的大型调查描绘了显著关联(例如Zeng 1986)，但是几乎所有人类的泛在EBV载体状态妨碍EBV血清学得到临床应用(Ho1998)。血清学高度灵敏但是缺乏特异性。

1992年首次证明了通过分子生物学手段检测EBV基因组进行鼻后活检的诊断希望(Feinmesser1992)。虽然生物样品中EBV基因组的分子检测已经成为健全常规程序，但是从小型学术研究(Tune1999) 到常规流动式应用的转变因为缺乏专用、一次性活检仪器并且需要快速、局部DNA分离以免DNA降解，所以很困难。两者均提出挑战，尤其是在具有不同技术基础设施水平的流行区。

发明概述

本发明人已经开发了一种用于筛查鼻咽癌症的高特异性和高灵敏度方法。

因此，本公开提供了一种在测试受试者中检测NPC或发展NPC 的风险的方法，其包括(a)提供鼻咽样品，(b)从所述样品分离DNA 及(c)使用实时PCR由所述DNA扩增并检测至少一个EBV靶序列，其中小于或等于31.5的实时PCR循环阈值次数表明所述测试受试者有鼻咽癌或发展鼻咽癌的风险。

在一个实施方案中，28至31.5的实时PCR循环阈值次数表明所述测试受试者有发展鼻咽癌的风险。

在另一个实施方案中，小于或等于28的实时PCR循环阈值次数表明所述测试受试者有鼻咽癌。

循环阈值(Ct)可用于计算爱波斯坦-巴尔病毒检测水平(EDL)。具体而言，Ct值可用于通过使用以对照EBV样品生成的标准曲线测定EBV拷贝数。EBV拷贝数的对数提供了EDL。表15展示了Ct值、 EBV拷贝和EDL之间的相关性。

在一个实施方案中，大于或等于2.7的EDL表明受试者患有NPC。