[发明专利]一种用于棒曲霉素检测的电化学适体比率传感器制备方法

权利要求书

1.一种用于棒曲霉素检测的电化学适体比率传感器制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）三金属复合纳米花的制备：采用水热合成法制备三金属复合纳米花，分别称取2~4mg金前体化合物、10~15 mg铂前体化合物、10~15 mg钯前体化合物和20~40 mg羰基金属配合物加入8~14 mL的混合有机溶剂中，超声处理10~20 min，在120~150℃保持1~2 h，通过离心收集所得产物，用有机溶剂洗涤后冷却至20~25℃，得到三金属复合纳米花；

（2）核酸适配体/三金属复合纳米花/氨基化金电极的制备：用氧化铝粉抛光金电极，将抛光后的金电极依次置于乙醇和超纯水中分别超声处理5~10 min，然后将金电极浸入强氧化溶液中15~30 min，用蒸馏水冲洗干燥，将金电极在氨基官能化溶液中进行CV扫描，在5~10 mM还原性溶液中进行负扫描，得到氨基化金电极；取2~6 μL上述三金属复合纳米花滴加至金电极表面，于红外灯下干燥5~10 min，移取3~6 μL 10~15 μM 5'端修饰二茂铁3'端修饰巯基的发夹探针DNA-1滴加至电极表面，于20~25℃下孵育8~12 h，移取3~6 μL封闭剂滴加至金电极表面，在35~40℃下孵育20~40 min，干燥即得到核酸适配体/三金属复合纳米花/氨基化金电极；

（3）核酸单链探针DNA-4的制备：采用酶循环切割法制备核酸单链探针DNA-4，移取3~6μL一定浓度的棒曲霉素加入3~6 μL 10~15 μM的发夹适体DNA-2溶液中，在35~40℃下孵育40~60 min，之后分别将5~10 μL 10~15 μM 5'端修饰电活性物质的发夹探针DNA-3和2~6 μL 10~15 U/μL的核酸外切酶Ⅲ添加至上述溶液中，在35~40℃下孵育40~60 min，将上述溶液在60~80℃的水浴中保持10~15 min，即得到核酸单链探针DNA-4；

（4）电化学传感器是以核酸适配体/三金属复合纳米花/氨基化金电极为工作电极，以铂丝电极为对电极，饱和氯化银作参比电极，将核酸单链探针DNA-4滴加至核酸适配体/三金属复合纳米花/氨基化金电极表面，通过电活性物质和二茂铁的信号比值变化测得棒曲霉素的浓度，得到了用于棒曲霉素含量检测的电化学适体传感器。

2.根据权利要求1所述的一种用于棒曲霉素检测的电化学适体比率传感器制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的金前体化合物为四氯金酸、氰化金钾、氰化金钠中的一种或多种，所述的铂前体化合物为二乙酰丙酮铂、氯铂酸、氯铂酸钠中的一种或多种，所述的钯前体化合物为氯化钯、氯钯酸钠、氯钯酸钾中的一种或多种；所述的羰基金属配合物为四羰基镍、六羰基钨、六羰基铬中的一种或多种；所述的混合有机溶剂为乙酸、二甲基甲酰胺的两种混合物，体积比为1:4~1:6；所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的一种用于棒曲霉素检测的电化学适体比率传感器制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的强氧化溶液为浓H₂SO₄、30% H₂O₂的两种溶液混合物，体积比为7:3~7:5；所述的氨基官能化溶液为80~110 mM四丁基四氟硼酸铵、对硝基苯四氟硼酸重氮盐的两种溶液混合物，体积比为80:1~120:1；所述的还原性溶液为水合肼、盐酸、过氯化亚锡、四氢锂铝中的一种或多种；所述的封闭剂为牛血清白蛋白、6-巯基己醇、酪蛋白中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的一种用于棒曲霉素检测的电化学适体比率传感器制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述的电活性物质为中性红、吡啶钌、亚甲基蓝、硫堇中的一种或多种。