[发明专利]一组新型的FN3类抗体突变体及其应用

说明书

本申请公开了一组新型的FN3类抗体突变体及其应用。其中，所述突变体对应原FN3类抗体包括以下突变位点：第85位A被E取代和第87位Y被M取代。原FN3类抗体的氨基酸序列如SEQ ID No：2所述；所述突变体对应原FN3类抗体包括以下突变位点：第35位Y被S取代、第56位P被L取代、第85位A被E取代和第87位Y被M取代。原FN3类抗体的氨基酸序列如SEQ ID No：2所述；所述突变体对应原FN3类抗体包括以下突变位点：第56位P被L取代、第85位A被E取代和第87位Y被M取代。原FN3类抗体的氨基酸序列如SEQ ID No：2所述。

技术领域

本发明是关于一个或多个新型FN3支架类抗体及其在试剂检测及医药上的应用。涉及生物蛋白及生物技术的领域。

背景技术

FN3支架类抗体是基于人源Ⅲ型第十纤连蛋白结构域的类抗体，只有 10kDa，分子量小，渗透性好，结构稳定。由高度稳定的β折叠区和三个环状可变区构成。类抗体支架蛋白的应用前景广阔，既可以在基础研究中发挥重大作用，又能应用于临床诊断与治疗。与传统的抗体药物相比，它具有很多明显的优势，包括低成本、胞内高稳定性、弱免疫效应以及口服易吸收等重要性质，已成为药物研发的热点领域之一。HA4类抗体是John Wojcik等通过噬菌体展示技术发现的一个FN3支架类抗体，它可以特异性的与人ABL1蛋白的SH2亚基结合。(John Wojcik etal.A potent and highly specific FN3 monobody inhibitorofthe Abl SH2 domain NATURE STRUCTURALMOLECULAR BIOLOGY.17，519-527(2010))

费城染色体(Philadelphia chromosome,Ph(or Ph')chromosome)，或称费城染色体易位(Philadelphia translocation)，是一种与慢性粒细胞性白血病(chronicmyelogenous leukemia,CML)相关的特殊染色体易位现象。其中细胞的9号染色体长臂与22号染色体长臂进行相互易位，具体定义为 t(9；22)(q34；q11)。这一染色体易位现象与慢性粒细胞性白血病有高度的灵敏度，有95％的慢性粒细胞性白血病患者被检测有此染色体易位(剩余的人群则是或存在一种G显带染色体制备过程中的隐形易位，或是存在其他多变的染色体易位情况)。

染色体易位是费城染色体中染色体缺失的主要原因。在九号染色体中长链的ABL1基因(位置q34)与二十二号染色体上长链的BCR基因(位置q11)发生并列性易位而产生一种新的融合基因(fusion gene)。根据国际人类细胞遗传学术语命名法(英语：InternationalSystem for Human Cytogenetic Nomenclature)，这种染色体易位被称为“t(9；22)(q34；q11)”。

这种易位产生了一种致癌的BCR-ABL1融合基因，位于因此变短的 22号染色体的长链上。此基因产生出一种BCR-ABL1融合蛋白。因为该融合基因的分子重量为185至210kDa，其也被称为p185或p210。ABL1 是一种酪氨酸激酶；在正常细胞中，它在细胞分化和细胞周期调控方面发挥重要作用。BCR-ABL1融合基因会导致酪氨酸激酶的组成性激活，从而导致不受控制的细胞增殖，从而产生癌变。

John Wojcik等试验证实：在细胞内的HA4类抗体通过与ABL1的 SH2亚基结合从而可以抑制ABL1的磷酸化过程，并抑制STAT5的活性，抑制酪氨酸激酶的组成性激活。这表明获得HA4抗体有可能成为抗癌候选药物，或用于BCR-ABL1导致的癌症的机理的研究等等。在前人研究的基础上，我们经过不懈的科学研究和实验，用生物技术的方法筛选到 HA4的突变体，分别命名为KJDL2、KJDL7、KJDL9(以下文中以KJDL 指代所有的突变体)，新的突变体与ABL1蛋白有更好的亲和力，成为更好的抗癌药物或者检测试剂盒的候选。同时我们的研究也发现，A85E和 Y87M是影响亲和力的两个关键性的氨基酸突变，当HA4的氨基酸序列上发生A85E和Y87M的突变后，再与其他位点的突变组合产生的新的类抗体与ABL1蛋白的亲和力均有提高。