[发明专利]一种PARP-1浓度的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种PARP-1浓度的检测方法，其特征在于，包括：

合成金纳米棒；

合成AuNPs-DNA分离体系；

在所述AuNPs-DNA分离体系中加入NAD⁺、含MoO₄^2-的酶反应缓冲液以及待测PARP-1进行反应；

将反应后溶液的上清液加入至含有2μL～3μL KI，5μL～15μL H₂O₂和40μL～60μL所述金纳米棒的酸性缓冲液中，在40℃～60℃下反应10min～20min；

对反应后的溶液放入紫外-可见光谱仪中进行检测，并观察溶液的颜色，以得到所述待测PARP-1的浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述合成AuNPs-DNA分离体系，包括：

将金纳米粒子、HS-ssDNA1与NaCl混合反应18h～24h，之后，加入HS-PEG和ssDNA2进行反应，离心处理后，以得到所述AuNPs-DNA分离体系。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述将金纳米粒子、HS-ssDNA1与NaCl混合反应18h～24h，之后，加入HS-PEG和ssDNA2进行反应，离心处理后，以得到所述AuNPs-DNA分离体系，包括：

将40μL～50μL的金纳米粒子加入0.5mg～1.5mg的BSPP中反应10h～15h，离心除去上清液；

将所述金纳米粒子再次分散在超纯水中，与2μL～4μL的HS-ssDNA1反应1h～3h，并每隔1h～3h添加一次NaCl，以进行混合反应18h～24h，得到盐化后的金纳米粒子溶液；

将1μL～2μL的HS-PEG加入至所述盐化后的金纳米粒子溶液中反应1h～3h，并加入2μL～4μL的ssDNA2与所述HS-ssDNA1进行杂交反应1h～3h，离心除去上清液，以得到所述AuNPs-DNA分离体系。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述在所述AuNPs-DNA分离体系中加入NAD⁺、含MoO₄^2-的酶反应缓冲液以及待测PARP-1进行反应，包括：

将40μL～60μL的所述AuNPs-DNA分离体系、5μL～15μL的NAD⁺和待测PARP-1在30℃～45℃温育1h～2h，第一次离心水洗去除上清液；

之后，分散在10μL～30μL含MoO₄^2-的酶反应缓冲液中，反应0.5h～1.5h后进行第二次离心处理。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述NAD⁺浓度范围为80μmol/L～120μmol/L；

所述含MoO₄^2-的酶反应缓冲液浓度范围为30nmol/L～50nmol/L。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述含MoO₄^2-的酶反应缓冲液包括：浓度范围为20nmol/L～40nmol/L的MoO₄^2-、浓度范围为5mmol/L～15mmol/L的Tris-HCl，以及浓度范围为0.1mol/L～0.2mol/L的NaCl。

7.根据权利要求1至6任一项所述的方法，其特征在于，所述金纳米棒与所述酸性缓冲液的体积比范围为0.1～1。

8.根据权利要求3至6任一项所述的方法，其特征在于，所述HS-ssDNA1浓度范围为5μmol/L～15μmol/L；

所述NaCl浓度范围为10mmol/L～30mmol/L；

所述HS-PEG浓度范围为5mmol/L～15mmol/L；

所述ssDNA2浓度范围为5μmol/L～15μmol/L。

9.一种PARP-1浓度检测方法的应用，其特征在于，采用权利要求1至8任一项所述的方法用于检测人体细胞中PARP-1的含量。