[发明专利]利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法

说明书

本发明涉及α‑维生素E测定方法，旨在提供一种利用固相萃取‑液相色谱法测定饮料中α‑维生素E的方法。通过利用C18固相萃取小柱把饮料中的α‑维生素E醋酸酯等脂溶性成分选择性萃取保留，其他水溶性干扰基质则不被保留。再用甲醇洗脱后，浓缩富集，用高效液相色谱—紫外分光光度法对α‑维生素E醋酸酯进行分离、测定，外标法定量；最后根据α‑维生素E和α‑维生素E醋酸酯之间的比值关系，直接计算得到α‑维生素E的含量。本发明无须强碱溶液皂化、无须大量有毒有机溶剂萃取，操作简单、效率高、成本低、环境友好；无须将α‑维生素E醋酸酯转化为α‑维生素E，结果不受水解转化率的影响，目标物的回收率高、检测结果稳定。

技术领域

本发明涉及α-维生素E测定方法，具体涉及利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法。

背景技术

α-维生素E(即α-生育酚)(分子式：C₂₉H₅₀O₂；CAS号：59-02-9)是自然界中活性最高的维生素E形式，是人体不可或缺的营养物质，在人体生理功能上发挥极其重要的作用。α-维生素E是饮料常用的营养补充剂，但由于α-维生素E不稳定，饮料生产过程中通常添加α-维生素E醋酸酯(分子式：C₃₁H₅₂O₃；CAS号：7695-91-2)进行替代。

关于饮料中α-维生素E的测定方法，根据国家标准GB 5009.82—2016《食品安全国家标准食品中维生素A、D、E的测定》，是通过强碱溶液皂化水解的方法对样品进行皂化将脂肪类物质转化为水溶性的脂肪酸盐物质，同时也将α-维生素E醋酸酯水解成α-维生素E，再采用石油醚等有机溶剂对α-维生素E进行萃取，浓缩后再采用色谱法对α-维生素E进行测定。

目前，文献中报道的有关α-维生素E的方法涉及的样品主要为婴幼儿配方食品、食用油等，前处理上一般也采用强碱溶液皂化的方法，对水解产生的α-维生素E采用石油醚等有机溶剂进行萃取、浓缩后再进行测定，而非直接提取添加的α-维生素E醋酸酯进行测定。

采用皂化法处理样品测定α-维生素E的方法，主要是基于两点考虑：(1)α-维生素E在紫外分光光度计上的响应比α-维生素E醋酸酯灵敏得多；(2)通过强碱溶液皂化可以将样品中的脂肪等有机干扰物转化为水溶性的脂肪酸，并采用液液萃取得以分离去除。

皂化法处理样品中α-维生素E的方法存在的主要不足是：(1)α-维生素E醋酸酯转化为α-维生素E的转化效率受反应条件影响较大，因此生成的α-维生素E的含量的重现性较不稳定，不利于产品质量控制；(2)前处理过程操作复杂，耗时长，需要大量的萃取用有机溶剂，对操作人员要求高，经济性较差且不够环保。

综上，对于饮料中α-维生素E醋酸酯直接测定需要解决的问题主要有以下两点：

(1)饮料基质十分复杂，含有大量的糖类、纤维素、有机酸、水溶性维生素、无机元素、蛋白质、脂肪等成分，还添加有大量稳定剂、乳化剂、增稠剂等食品添加剂，上述成分对α-维生素E醋酸酯的测定带来严重干扰，影响仪器的灵敏度和结果的稳定性。

(2)由于饮料中α-维生素E醋酸酯的含量比较低，且α-维生素E醋酸酯在紫外检测器上的响应远不如α-维生素E灵敏，客观上直接测定饮料中α-维生素E醋酸酯在技术上存在一定困难。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供一种利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法。

为解决技术问题，本发明的解决方案是：

提供一种利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法，包括以下步骤：

(1)制备α-维生素E醋酸酯标准储备液，利用液相色谱-紫外分光光度仪测试以获取标准谱图和标准曲线；

(2)样品处理