[发明专利]一种人类精子冷冻保存方法

权利要求书

1.一种人类精子冷冻保存方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将精液液化，得到液化精液；

S2、将S1得到的液化精液洗涤，离心，重复上述操作2～4次，然后在培养箱中培养，得到精子样品；

S3、将S2得到的精子样品与海藻糖溶液混匀，得到混合液；

所述S2得到的精子样品与海藻糖溶液的体积比为1:1，且所述海藻糖溶液的浓度为0.25～1.0mol/L；

S4、将S3得到的混合液与添加剂混合均匀，接着在培养箱中平衡，然后装入保存容器中，浸入液氮中进行玻璃化冷冻保存；所述S3得到的混合液与冷冻液的体积比为200:1；

所述添加剂由以下浓度的组分组成：

L-还原型谷胱甘肽15.365～122.92g/L、氯化钠5.7154g/L、氯化钾0.3496g/L、硫酸镁0.0241g/L、磷酸二氢钾0.0504g/L、二水合氯化钙0.3000g/L、碳酸氢钠2.1003g/L、葡萄糖0.5008g/L、丙酮酸钠0.0363g/L、乳酸钠3.9968g/L、硫酸庆大霉素0.0100g/L、人血清白蛋白5g/L，余量为超纯水。

2.根据权利要求1所述的人类精子冷冻保存方法，其特征在于，步骤S2中，所述S1得到的液化精液通过人输卵管液进行洗涤，且所述人输卵管液由以下浓度的组分组成：

氯化钠5.7154g/L、氯化钾0.3496g/L、硫酸镁0.0241g/L、磷酸二氢钾0.0504g/L、二水合氯化钙0.3000g/L、碳酸氢钠2.1003g/L、葡萄糖0.5008g/L、丙酮酸钠0.0363g/L、乳酸钠3.9968g/L、硫酸庆大霉素0.0100g/L、人血清白蛋白5g/L，余量为超纯水。

3.根据权利要求2所述的人类精子冷冻保存方法，其特征在于，所述S1得到的液化精液与人输卵管液的体积比为1:2。

4.根据权利要求1所述的人类精子冷冻保存方法，其特征在于，步骤S2和S4中，所述培养箱为CO₂培养箱。

5.根据权利要求1所述的人类精子冷冻保存方法，其特征在于，步骤S4中，所述保存容器为冷冻麦管。