[发明专利]一种具有抗炎作用的忍冬藤提取物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有抗炎作用的忍冬藤提取物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)称取忍冬藤药材，取10-15倍忍冬藤药材重量、浓度为50-70重量％乙醇水溶液室温浸泡忍冬藤药材2-4小时，热回流提取2-3次，每次1-3小时，过滤后收集滤液，通过减压浓缩至无醇味，得忍冬藤浓缩液；

(2)忍冬藤浓缩液加入石油醚萃取脱脂，除去石油醚部位，减压浓缩至无试剂味，冷冻干燥得石油醚萃余部位；

(3)取预处理后的AB-8型大孔树脂湿法装柱，将步骤(2)中得到的石油醚萃余部位加水溶解上样，每克树脂最大上样量低于0.8g石油醚萃余部位，采用3-6倍柱体积的纯水洗脱，得到水部位(S₁)，采用3-6倍柱体积，浓度为15重量％乙醇水溶液洗脱，15％乙醇部位(S₂)，采用3-6倍柱体积，浓度为30重量％乙醇水溶液洗脱，30％乙醇部位(S₃)，采用3-6倍柱体积，浓度为50重量％乙醇水溶液洗脱，50％乙醇部位(S₄)，最后采用3-6倍柱体积，浓度为95重量％乙醇水溶液洗脱，得到95％乙醇部位(S₅)；

(4)分别收集50％乙醇部位(S₄)忍冬藤提取物和95％乙醇部位(S₅)忍冬藤提取物；

其中，AB-8型大孔树脂预处理方法为：AB-8型大孔树脂中加入乙醇，浸泡12-24h，确保树脂充分溶胀，此后，湿法装柱并使用4-6倍柱体积的纯水清洗至无醇味即可。

2.一种具有抗炎作用的忍冬藤提取物的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

(5)合并S₄、S₅的提取物，经旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥得到S₄、S₅提取物粉末。

3.根据权利要求1所述的具有抗炎作用的忍冬藤提取物的制备方法，其特征在于：步骤(4)中得到的S₄提取物、S₅提取物分别处理，具体步骤如下：

忍冬藤S₄部位经MCI反相中压制备以纯水(A)-甲醇(B)为流动相梯度洗脱，洗脱梯度：0～20min，5％B；20～40min，10％B；40～60min，20％B；60～80min，30％B；80～100min，40％B；100～120min，50％B；120～140min，60％B；140～160min，70％B；160～180min，80％B；180～200min，90％B；200～220min，95％B；所述MCI粒径为75-150μm，洗脱流速20mL/min，检测波长为327nm和260nm；收集5.2-5.5BV和5.7-5.9BV的流出液；

5.2-5.5BV的流出液浓缩，经制备型高效液相色谱(Hedera ODS,5μm,20×250mm)，以纯水(A)-甲醇(B)为流动相梯度洗脱，洗脱梯度：0.01～15.00min，10％-30％B；15.00～45.00min，30％-50％B；45.00～60.00min，50％-100％B；在30-33min时间段收集异绿原酸A储备液，35-39min时间段收集异绿原酸C储备液；异绿原酸A储备液再经制备型高效液相色谱得到单体化合物异绿原酸A(H₂O:MeOH＝60:40)，异绿原酸C储备液再经制备型高效液相色谱得到单体化合物异绿原酸C(H₂O:MeOH＝58:42)；检测波长均为327nm和260nm；

5.7-5.9BV的流出液浓缩，经制备型高效液相色谱(Hedera ODS,5μm,20×250mm)以纯水(A)-甲醇(B)为流动相梯度洗脱，洗脱梯度：0.01～15.00min，10％-40％B；15.00～40.00min，40％-50％B；40.00～50.00min，50％-100％B；在30-36min时间段收集grandifloroside；检测波长为327nm和260nm；

忍冬藤S₅部位经MCI反相中压制备以纯水(A)-甲醇(B)为流动相梯度洗脱，其中A为纯水，B为甲醇；洗脱梯度：0～20min，5％B；20～40min，10％B；40～60min，20％B；60～80min，30％B；80～100min，40％B；100～120min，50％B；120～140min，60％B；140～160min，70％B；160～180min，80％B；180～200min，90％B；200～220min，95％B；所述MCI粒径为75-150μm，洗脱流速20mL/min，检测波长为335nm和260nm；收集9.3-9.7BV的流出液；

9.3-9.7BV的流出液浓缩，经制备型高效液相色谱(Hedera ODS,5μm,20×250mm)等度洗脱(H₂O:MeOH＝16:84)得到金莲木黄酮(t_R＝22-25min)，检测波长为335nm和260nm；

分别把单独收集的异绿原酸A、异绿原酸C和金莲木黄酮合并，经旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥，得到忍冬藤提取物粉末。