[发明专利]一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法

说明书

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体公开了一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，包括以箭叶淫羊藿种胚为外植体，通过对完全干燥的种子消毒、种子低温培养、诱导外植体生成愈伤组织、诱导愈伤组织分化出不定芽或丛生芽、诱导芽体形成须根、炼苗、育苗等过程获得箭叶淫羊藿再生苗，建立了箭叶淫羊藿植物组织培养快速繁殖体系。具有操作简单，污染率低，繁殖周期短，繁殖率高，成本低，幼苗田间存活率高等优点，为箭叶淫羊藿工厂化生产，提供技术支撑，对箭叶淫羊藿野生资源的保护有一定的促进作用。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，更具体涉及一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法。

背景技术

中药材淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(Epimedium)植物的干燥叶片，在我国作为药材使用已有2000余年历史。目前淫羊藿药材的获取主要依靠于野外采摘，灭绝式采挖使淫羊藿药材野生资源急剧减少，供需矛盾日益加剧。箭叶淫羊藿(Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.)是《中国药典》淫羊藿药材的基原植物之一，使用量较大，目前该种的人工种植已经在多个省份开展起来。种苗繁育技术作为人工种植的关键环节，箭叶淫羊藿的种苗繁育主要是地下根茎分兜繁殖和种胚繁殖，但是根茎繁殖繁殖系数低、种胚繁殖周期长，严重制约了箭叶淫羊藿规模化种植产业的发展。

植物组织培养技术利用植物细胞全能性，将植物的器官、组织、原生质体等作为组织培养的外植体，在适宜的环境下，经过诱导进而分化成完整植株。由于高效快速，植物组织培养技术已经广泛应用于园林园艺及药用植株的种苗生产。目前，箭叶淫羊藿关于组培技术报道相对较少，利用箭叶淫羊藿种胚诱导形成愈伤组织脱分化再分化形成无菌苗进行植物组织培养更是鲜有报道，为淫羊藿的育种技术奠定坚实的基础。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种完善的箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，具有操作简单，污染率低，繁殖周期短，繁殖率高，成本低，幼苗田间存活率高等优点，便于大规模工业化生产。

为进一步实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，其构思是：以箭叶淫羊藿种胚为外植体，通过对完全干燥的种子消毒、种子低温培养、诱导外植体生成愈伤组织、诱导愈伤组织分化出不定芽或丛生芽、诱导芽体形成须根、炼苗、育苗等过程获得箭叶淫羊藿再生苗，建立了箭叶淫羊藿植物组织培养快速繁殖体系。大大提高了箭叶淫羊藿愈伤组织的诱导率，消毒过程更加完善，且简化了操作过程，缩短育种周期，为淫羊藿的工厂化生产奠定了良好的基础。

一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，包括以下步骤：

(1)干燥后种子的消毒：从种子收集袋中选取完全干燥后健康饱满的种子，去除草叶等杂质后，撕去种子上的种膜，用洗洁精溶液1:500比例清洗，置于震荡箱中120rpm，震荡1h，去除其表面附着的灰尘，清水冲洗3-4次除去残留的洗洁精；移入超净工作台，然后用75％的酒精溶液震荡消毒30s，无菌水冲洗2遍，将种子置于0.1％质量浓度的HgCl₂溶液中，120rpm震荡消毒10min，取出用无菌水漂洗3-4次除去残留的HgCl₂溶液；然后置于灭过菌的滤纸除去残留的水分备用。

(2)种子低温培养：将消毒后的种子接种到播种培养皿上，封口膜密封后，放置于4℃冰箱无菌冷藏培养60天。

(3)诱导外植体生成愈伤组织：挑取冰箱中刚萌芽的种子置于超净工作台中，用无菌镊子与解剖针剥除种皮，取出种胚，并用灭过菌的解剖刀沿种胚纵向轻轻划伤1道，轻贴于愈伤组织诱导培养基a上，接种到愈伤组织诱导培养基a上；在光强1000-2000lux，14h/天光照进行培养，培养温度24-26℃条件下；每三周(21天)更换一次培养基，所换培养基配方与原培养基一致，诱导生成愈伤组织；待初步生成愈伤组织后(以肉眼可见在创口处形成团簇状淡绿色愈伤组织)，转接愈伤组织诱导培养基b上，同等光照和温度条件，促进愈伤组织加速形成，42天后统计愈伤组织增长率。