[发明专利]基于质谱技术的阳性血培养液病原微生物的快速分离试剂、分离方法及微生物鉴定方法在审
申请号: | 202010440472.4 | 申请日: | 2020-05-22 |
公开(公告)号: | CN111778175A | 公开(公告)日: | 2020-10-16 |
发明(设计)人: | 包克非;宋海平;靖广旭;李桃;高雪洁 | 申请(专利权)人: | 重庆中元汇吉生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12N1/02;C12Q1/04;G01N27/62 |
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地址: | 400000 重庆市大渡口区*** | 国省代码: | 重庆;50 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 基于 技术 阳性 培养液 病原微生物 快速 分离 试剂 方法 微生物 鉴定 | ||
1.一种阳性血培养液病原微生物的分离试剂,包括用于溶解血细胞的裂解液A、用作清洗剂的清洗液I,其特征在于,所述裂解液A为皂素溶液,所述清洗液I为尿素溶液。
2.如权利要求1所述的试剂,其特征在于:所述裂解液A的浓度为0.5g/mL-2g/mL。
3.如权利要求1所述的试剂,其特征在于,所述清洗液I的浓度为4mol/L-7mol/L。
4.如权利要求1所述的试剂,其特征在于:所述试剂还包括清洗液II,所述清洗液II为超纯水、去离子水或蒸馏水。
5.一种采用如权利要求1-4中任一项所述的试剂从阳性血培养液中分离细菌的方法,所述方法包括以下步骤:
(1)将阳性血培养液加入裂解液A,混合均匀,室温静置;
(2)振荡混匀,400-600g离心,弃上清;
(3)向沉淀中加入清洗液I,洗涤后,11000-13000g离心,弃上清;
(4)向沉淀中加入清洗液II,洗涤后,11000-13000g离心,弃上清,沉淀为细菌菌体。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于:所述待测样本与裂解液A的体积比在5:1到5:2之间。
7.如权利要求5所述的方法,其特征在于:所述待测样本与清洗液I、清洗液II的体积比在3:1到2:1之间。
8.一种血液中细菌鉴定的方法,所述方法包括以下步骤:
(1)按照权利要求5所述细菌分离方法,分离阳性血培养液中的细菌;
(2)取上述细菌分离样品,加入促进细胞中蛋白释放的甲酸以及乙腈;
(3)振荡混匀,11000-13000g离心;
(4)取1μL上清液点样到靶板的孔位上,室温干燥;
(5)覆盖1-2μL的基质于样品上,室温干燥;
(6)采用飞行时间质谱仪进行检测,获得质谱图。
9.如权利要求8所述的方法,其特征为所述甲酸的浓度为60%-80%,所述乙腈的浓度为80%-100%。
10.如权利要求8所述的方法,其特征在于:所述待测样本与甲酸、乙腈的总体积的体积比在50:1到50:3之间。
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