[发明专利]与胃癌诊断相关的3’末端-2’-O甲基化修饰miRNA标志物组合及其应用

说明书

本发明公开了与胃癌诊断相关的3’末端‑2’‑O甲基化修饰miRNA标志物组合及其应用。3’末端‑2’‑O‑甲基化修饰的miRNA组合至少包括：miR‑451,miR‑1和let‑7f。采用本发明的标志物联合进行胃癌临床检测具有经济、快速、灵敏和特异性好等特点。可以进行广泛的健康筛查，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物检测领域，涉及与胃癌诊断相关的3’末端-2’-O甲基化修饰miRNA标志物组合及其应用。

背景技术

胃癌(gastric cancer,GC)是胃黏膜上皮起源的恶性肿瘤，是全球公认的第五大常见癌症和第三大癌症致死原因。胃癌病历大多发生在发展中国家，又以东南亚地区最为高发，其中中国和日本胃癌发病率最为突出。胃癌发病隐匿，多数患者出现症状时已发生远处转移，这严重影响了胃癌患者的预后。目前推行的胃癌患者筛查手段如胃镜或血浆传统肿瘤标志物检查患者感受较为痛苦同时也缺乏较强的诊断敏感性和特异性。因此，发现肿瘤早期诊断的分子标志物显得尤为重要。

miRNA(microRNA,微小RNA)是一类具有非编码特性的单链RNA分子，其长度为18-22nt左右。可以稳定存在于几乎所有体液环境中。目前已发现miRNA在个体生长发育的各个过程中几乎都发挥着重要作用。而在胃癌中也发现miRNA在肿瘤细胞增殖、转移、耐药等方面发挥着重要作用。而肿瘤细胞分泌进入血浆中的循环肿瘤miRNA作为一种无创诊断标志物也越来越受到人们的重视。但是由于miRNA检测存在假阳性高，个体差异明显以及没有合适内参校正等问题使得其临床应用较为缓慢。

近期的研究表明，miRNA中存在甲基化、乙酰化等多种修饰方式，这些修饰影响了miRNA的生成、稳定以及miRNA与靶基因的结合等各个方面。3’末端-2’-O甲基化修饰是发生在RNA 3’末端的一种甲基化修饰方法。早在2005年就有研究人员发现植物miRNA的成熟过程中会发生3’末端的2’-O甲基化修饰，这种修饰方法可以使植物miRNA更加耐受RNA酶的降解作用。而近期的研究表明昆虫和哺乳动物体内的多种小分子RNA也都存在3’末端的甲基化修饰作用。而RNA分子发生甲基化修饰可以使其免受细胞中多种核酸外切酶、连接酶、末端转移酶以及聚合酶等多种酶的攻击，因而可以使其长期稳定存在于体内环境中。但由于目前甲基化的检测方法多需要质谱和测序等方法，操作繁琐，成本较高，不满足临床筛查的需要，因而限制了甲基化检测在临床应用中的发展。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供与胃癌诊断相关的3’末端-2’-O甲基化修饰miRNA标志物或其组合。

本发明的又一目的是提供与胃癌诊断相关的3’末端-2’-O甲基化修饰miRNA标志物或其组合的应用。

本发明的又一目的是提供一种胃癌辅助诊断试剂盒。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

与胃癌诊断相关的3’末端-2’-O甲基化修饰miRNA标志物，选自下列miRNA中的任意一种或多种：miR-451,miR-1,let-7f,miR-92a,miR-10a,miR-21。

表1.本发明筛选出差异化miRNA。

与胃癌诊断相关的3’末端-2’-O甲基化修饰miRNA标志物组合，包括miR-451,miR-1和let-7f。

本发明所述的与胃癌诊断相关的3’末端-2’-O甲基化修饰miRNA标志物组合优选还包括miR-92a,miR-10a,miR-21中的任意一种或多种。

所述的与胃癌诊断相关的3’末端-2’-O甲基化修饰miRNA标志物组合优选由miR-451,miR-1、let-7f和miR-92a组成。