[发明专利]一类生物碱及其提取分离方法和应用

权利要求书

1.一类生物碱类化合物的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取九子连干燥根茎，回流提取若干次合并提取液，将提取液减压浓缩，得到总浸膏；

2)将总浸膏混悬于水中，依次经乙酸乙酯和正丁醇萃取若干次后分离出有机层，减压除去有机溶剂分别得到乙酸乙酯层和正丁醇层；

3)将正丁醇萃取层上样于硅胶柱，以氯仿-甲醇系统作为洗脱液，按体积比(100:0)～(0:100)进行梯度洗脱，对流出液进行TLC检测，经薄层检识合并后，共得到15个流份，编号记为Bu-1～Bu-15，得到第一次过柱部分；

4)将第一次过柱部分Bu-9经ODS柱色谱进行分离，以甲醇-水作为洗脱液，按体积比(10:90)～(100:0)进行梯度洗脱得到8个流份，编号记为Bu-9-1～Bu-9-8；将第一次过柱部分Bu-12经ODS柱色谱进行分离，以甲醇-水作为洗脱液，按体积比(10:90)～(100:0)进行梯度洗脱得到10个流份，编号记为Bu-12-1～Bu-12-10，得到第二次过柱部分；

5)将第二次过柱部分的Bu-9-5流份经HPLC分离纯化，以甲醇-水按30：70的体积比作为流动相进行等度洗脱，分离得到化合物1和2；将第二次过柱部分的Bu-12-3流份经HPLC分离纯化，以甲醇-水按27：73的体积比作为流动相进行等度洗脱，分离得到化合物3和4；

其中，化合物1的分子式为C₂₀H₂₆N₂O₇，R为1个葡萄糖，6′位为S构型；化合物2的分子式为C₂₀H₂₆N₂O₇，R为1个葡萄糖，6′位为R构型；化合物1和化合物2的结构式分别如下：

化合物3的分子式为C₂₆H₃₆N₂O₁₂，R为2个葡萄糖，6′位为S构型；化合物4的分子式为C₂₆H₃₆N₂O₁₂，R为2个葡萄糖，6′位为R构型；化合物3和化合物4的结构式分别如下：

2.根据权利要求1所述的生物碱类化合物的提取分离方法，其特征在于，步骤1)中，回流提取次数为1～5次，每次1～3h。

3.根据权利要求1所述的生物碱类化合物的提取分离方法，其特征在于，步骤1)中，回流提取中采用纯甲醇或体积分数为10％～95％的乙醇作为提取剂，九子连干燥根茎与提取剂的料液比为1kg：(1～8)L。

4.根据权利要求1所述的生物碱类化合物的提取分离方法，其特征在于，步骤2)中，总浸膏和水的体积比为1:1～1:4。

5.根据权利要求1所述的生物碱类化合物的提取分离方法，其特征在于，步骤5)中，HPLC分离中，等度洗脱的流速为2～10mL/min。