[发明专利]一种用于呕吐毒素检测的双信号电化学适体传感器制备方法

权利要求书

1.一种用于呕吐毒素检测的双信号电化学适体传感器制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）贵金属-过渡金属硫族化合物纳米材料的制备：采用一锅溶剂热法制备过渡金属硫族化合物纳米材料，将0.5~0.7 g过渡金属粉末和0.2~0.4 g硼氢化钠溶于60~70 mL分散剂中搅拌0.5~1.5 h，加入0.9~1.0 g六水合过渡金属二氯化物继续搅拌0.5~1.5 h，得到均匀分散的黑色溶液；将制备好的前体溶液放入聚四氟乙烯内衬高压釜中，在150~170℃的烘箱中保温20~24 h，在50~60℃下处理10~12 h即得过渡金属硫族化合物纳米材料；采用氧化还原法在过渡金属硫族化合物纳米材料上原位生成贵金属纳米粒子，将10~15 mg制备好的过渡金属硫族化合物纳米材料超声分散在15~20 mL还原剂中，将3~5 mL 1~3 mg/mL贵金属溶液加入混合物中，在70~90℃下孵育12~24 h，洗涤后在70~90℃下干燥至恒重；其中，所述的贵金属为金、铑、钯、铂中的一种或多种；所述的过渡金属硫族化合物为二硫化钼、二硫化钨、二硒化钼、二硒化镍、二硒化钨中的一种或多种；所述的分散剂为乙二胺、N，N-二甲基甲酰胺、异丙醇、乙醇、丙酮中的一种或多种；所述的过渡金属为钼、钨、镍中的一种或多种；所述还原剂为含0.5 wt%壳聚糖乙酸溶液、抗坏血酸、柠檬酸盐、水合肼中的一种或多种；所述的贵金属溶液为氯铂酸、氯金酸、醋酸钯、硝酸铑中的一种或多种；

（2）dsDNA的制备：将10~20 μL 1~5 μM适体链DNA₁与10~20 μL 1~5 μM 3'端修饰有信号分子a 5'端修饰有巯基的互补链a-DNA₂-SH在30~40℃下混合12~24 h，即得到dsDNA；其中，所述的信号分子a为硫堇、亚甲基蓝、二茂铁、中性红中的一种或多种；

（3）信号分子b/dsDNA/贵金属-过渡金属硫族化合物纳米材料/金电极的制备：首先用氧化铝粉抛光金电极，将抛光后的金电极依次置于乙醇和蒸馏水中分别超声处理5~10min，然后将金电极浸入强氧化溶液中20~60 min，用蒸馏水冲洗干燥，取1~10 mg上述制备的贵金属-过渡金属硫族化合物纳米材料分散至1~5 mL蒸馏水中，取1~7 μL上述溶液滴加至金电极表面，于红外灯下干燥6~10 min，移取1~7 μL上述dsDNA滴加至电极表面，在30~40℃孵育1~2 h后，用pH为7.2~7.6的缓冲液洗涤，移取3~7 μL信号分子b滴加至dsDNA/贵金属-过渡金属硫族化合物纳米材料/金电极表面，在30~40℃孵育1~2 h，移取5~10 μL不同浓度呕吐毒素和1~5 U核酸外切酶的混合物滴加至电极表面于30~40℃孵育1~2 h，得到信号分子b/dsDNA/贵金属-过渡金属硫族化合物纳米材料/金电极；其中，所述的信号分子b为硫堇、亚甲基蓝、二茂铁、中性红中的一种或多种；所述的强氧化溶液为过氧化氢、浓硫酸混合物，体积比为1:1~3:1；所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或多种；所述的核酸外切酶为Recjf外切酶、EXO Ⅲ外切酶、T7 EXO外切酶中的一种或多种；

（4）电化学适体传感器是以信号分子b/dsDNA/贵金属-过渡金属硫族化合物纳米材料/金电极为工作电极，以银|氯化银电极为参比电极，铂丝电极为对电极，通过信号分子a和信号分子b的响应信号变化指示样品中呕吐毒素的含量，得到了用于呕吐毒素检测的双信号电化学适体传感器。