[发明专利]一种基于疏水相互作用构筑蛋白质/磷脂/胆固醇多元杂合微尺度囊泡的方法

权利要求书

1.一种基于疏水相互作用构筑蛋白质/磷脂/胆固醇多元杂合微尺度囊泡的方法，其特征在于基于疏水相互作用构筑蛋白质/磷脂/胆固醇多元杂合微尺度囊泡的方法具体是按以下步骤进行的：

一、将氨基化牛血清白蛋白溶于DMSO试剂中，再向其中滴加碳酸氢钠缓冲溶液，配制成氨基化牛血清白蛋白溶液；所述氨基化牛血清白蛋白溶液的浓度为1.0～2.0mg/mL；所述氨基化牛血清白蛋白的质量与碳酸氢钠缓冲溶液的体积比为1mg:(0.1～0.5)mL；所述碳酸氢钠缓冲溶液的浓度为25～50mmol/L；所述DMSO试剂中DMSO与H₂O的体积比为1:(5～10)；

二、将羧基化胆固醇溶于DMSO试剂中，再向其中滴加碳酸氢钠缓冲溶液，配制成胆固醇溶液；所述胆固醇溶液的浓度为0.02～0.1mg/mL；所述羧基化胆固醇的质量与碳酸氢钠缓冲溶液的体积比为0.1mg:(0.3～0.5)mL；所述碳酸氢钠缓冲溶液的浓度为25～50mmol/L；所述DMSO试剂中DMSO与H₂O的体积比为1:(5～10)；

三、将胆固醇溶液以0.5～3mL/min的速率滴入氨基化牛血清白蛋白溶液中，再依次加入EDAC和DMAP，充分搅拌混合后在室温下反应12～24h，反应完成后过滤、透析、冷冻干燥，得到牛血清白蛋白-胆固醇耦合物；所述胆固醇溶液与氨基化牛血清白蛋白溶液的体积比为1:(0.5～2)；所述EDAC的质量与氨基化牛血清白蛋白溶液的体积比为1mg:(0.5～1.0)mL；所述DMAP的质量与氨基化牛血清白蛋白溶液的体积比为1mg:(2.5～10)mL；

四、将牛血清白蛋白-胆固醇耦合物溶于PBS缓冲溶液中在磁力搅拌下配制成牛血清白蛋白-胆固醇耦合物溶液；然后将聚N-异丙基丙烯酰胺放入蒸馏水中，并置于-24℃溶解，配制成聚N-异丙基丙烯酰胺溶液；将聚N-异丙基丙烯酰胺溶液以0.5～3mL/min的速率滴加到牛血清白蛋白-胆固醇耦合物溶液中，得到反应液，在室温下反应12～24h，反应完成后过滤、透析、冷冻干燥，得到牛血清白蛋白-胆固醇/聚N-异丙基丙烯酰胺耦合物；所述牛血清白蛋白-胆固醇耦合物溶液的浓度为0.5～1mg/mL；所述聚N-异丙基丙烯酰胺溶液的浓度为0.5～1mg/mL；所述PBS缓冲溶液的pH值为8.5；所述牛血清白蛋白-胆固醇耦合物与聚N-异丙基丙烯酰胺的质量比为1:(1～1.5)；

五、将牛血清白蛋白-胆固醇/聚N-异丙基丙烯酰胺耦合物溶于纯净水中，配置成耦合物水溶液，向其中依次加入pH为8.0～9.0的NaHCO₃缓冲溶液、浓度为0.5～1g/mL的交联剂，根据水油比例1：(8～15)添加异辛醇，并快速充分摇晃30～60s，然后静置，在室温下反应12～20h，离心管底部生成白色产物，通过75％的酒精和蒸馏水转移、清洗，得到水相蛋白质囊泡溶液；所述耦合物水溶液的浓度为5～20mg/mL；所述耦合物水溶液与pH为8.0～9.0的NaHCO₃缓冲溶液的体积比为1:(0.2～1)；所述耦合物水溶液与浓度为0.5～1g/mL的交联剂的体积比为1:(0.2～0.5)；

六、将荧光磷脂配制成荧光磷脂氯仿溶液；将荧光磷脂氯仿溶液采用氩气将氯仿蒸发，然后加入蒸馏水配制成荧光磷脂水溶液；将荧光磷脂水溶液加入到水相蛋白质囊泡溶液中震荡，并在室温下放置0.5～2h，得到杂合囊泡水溶液；所述荧光磷脂氯仿溶液的浓度为1～2mg/mL；所述荧光磷脂水溶液的浓度为0.1～0.2mg/mL；所述荧光磷脂水溶液与水相蛋白质囊泡溶液的体积比为1:(2.5～10)。

2.根据权利要求1所述的一种基于疏水相互作用构筑蛋白质/磷脂/胆固醇多元杂合微尺度囊泡的方法，其特征在于步骤一中所述氨基化牛血清白蛋白溶液的浓度为1.5mg/mL。

3.根据权利要求1所述的一种基于疏水相互作用构筑蛋白质/磷脂/胆固醇多元杂合微尺度囊泡的方法，其特征在于步骤二中所述胆固醇溶液的浓度为0.04mg/mL。

4.根据权利要求1所述的一种基于疏水相互作用构筑蛋白质/磷脂/胆固醇多元杂合微尺度囊泡的方法，其特征在于步骤三中所述胆固醇溶液与氨基化牛血清白蛋白溶液的体积比为1:1。