[发明专利]一种通过SFRP4促进棕色脂肪分化的方法及应用

权利要求书

1.一种通过SFRP4促进棕色脂肪组织分化的方法，其特征在于，按照以下步骤具体实施：

步骤1、原代前体脂肪细胞的分离和培养

步骤1.1、取小鼠棕色脂肪组织，剪碎后用Ⅰ型胶原酶消化，得到细胞悬浮液；

步骤1.2、用200目筛网过滤步骤1.1得到的细胞悬浮液，取其滤液离心，弃掉上清，再加入红细胞裂解液吹打混匀，离心并弃掉上清，最后PBS缓冲液吹打混匀，离心弃掉上清；

步骤1.3、在步骤1.2得到的样本中加入10%FBS DMEM/F12完全培养基，移液枪吹打均匀并制成细胞悬浮液，接种到T25细胞培养瓶并培养；

步骤2、依次用1,10,100 ng/mL的SFRP4活性蛋白处理步骤1得到的细胞，待细胞生长至80%时，用细胞分化诱导培养基Ⅰ进行培养至细胞融合，再依次用细胞分化诱导培养基Ⅱ培养2天、诱导培养基Ⅲ培养至第8天使其达到终末分化；

细胞分化诱导培养基Ⅰ为10%胎牛血清、1nM三碘甲状腺原氨酸T3和20nM胰岛素的完全培养基；细胞分化诱导培养基Ⅱ为0.5mM磷酸二酯酶抑制试剂IBMX，0.5μM马地塞米松Dex，20nM胰岛素和1nM三碘甲状腺原氨酸T3和125μM罗格列酮Rosi的完全培养基；细胞分化诱导培养基Ⅲ为20nM胰岛素和1nM三碘甲状腺原氨酸T3的完全培养基。

2.如权利要求1所述的一种通过SFRP4促进棕色脂肪组织分化的方法，其特征在于，所述步骤1中消化时间为40min，消化操作置于37℃、2000rpm/min的水浴摇床上进行。

3.如权利要求1所述的一种通过SFRP4促进棕色脂肪组织分化的方法，其特征在于，所述步骤1.2中第一次离心的条件为：离心时间为10min ，离心速率为1500r/min；第二次离心的条件为：离心时间为10min ，离心速率为1000r/min；第三次离心的条件为：离心时间为10min ，离心速率为1000r/min。

4.如权利要求1所述的一种通过SFRP4促进棕色脂肪组织分化的方法，其特征在于，通过油红O染色分析法判断诱导对所述步骤2中的棕色脂肪细胞的影响。

5.如权利要求1所述的一种通过SFRP4促进棕色脂肪组织分化的方法，其特征在于，使用Trizol法提取细胞总RNA鉴定所述步骤2中脂肪细胞是否分化。

6.如权利要求1~5任一项所述的SFRP4在促进棕色脂肪组织分化中的应用。