[发明专利]一种新型细胞保存液及其制备方法

说明书

本发明涉及一种新型细胞保存液及其制备方法，其涉及保存液领域，旨在解决口腔细胞在现有细胞保存液中存活率低的问题，新型细胞保存液包括以下组分：氯化钠0.41‑1.3wt%，磷酸二氢钠0.07‑1.3wt%，磷酸氢二钠0.01‑1.1wt%，无水乙醇10‑36wt%，柠檬酸钠0.02‑1.5wt%，胰蛋白酶0.02‑1.5wt%，杀菌剂0.2‑0.68wt%，离子补充剂0.16‑0.66wt%，离子螯合剂0.08‑0.23wt%，稳定剂0.03‑1.11wt%，其余为纯化水。本申请制备得到的细胞保存液有效防止常温下样本中微生物种类、相对丰度和完整性发生改变，细胞保存率高，后继可用于酶切、PCR和二代测序等多种生物学实验；而且制备方法简单。

技术领域

本发明涉及细胞的技术领域，尤其是涉及一种新型细胞保存液及其制备方法。

背景技术

细胞保存液是起到保持、固定细胞原形态结构的作用的一种试剂，是病理细胞诊断基础，但是，如果细胞形态结构发生变化，可能会带来诊断结果的误差，所以需要利用细胞保存液进行固定细胞形态。

现有申请号为CN201710732482.3的中国专利，公开了一种样本保存液其特征在于：由醇类40-50％，甲醛10-15％，碱类物质适量，保湿剂0.1％，0.5％，氯化钾溶液10-20％，其余为水。

而在人体结构中，口腔和咽部是微生物进入呼吸道、消化道、血液的重要门户，正常情况下口腔微生物群落之间、微生物与宿主之间密切且复杂的相互作用维持着宿主健康，这种生态平衡被打破将会引发疾病，因此口腔细胞的检测十分重要。

但是，由于口腔和喉部会分泌处大量的粘液，使得细胞不能很好地分散在细胞保存液中，造成细胞丰度和完整性的破坏，细胞存活率低影响后续的实验和检测。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种新型细胞保存液及其制备方法，本申请制备得到的细胞保存液可在常温条件下保存口腔和咽部的微生物基因组，有效防止常温下样本中微生物种类、相对丰度和完整性发生改变，细胞保存率高；而且制备方法简单。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.41-1.3wt％，磷酸二氢钠0.07-1.3wt％，磷酸氢二钠0.01-1.1wt％，无水乙醇10-36wt％，柠檬酸钠0.02-1.5wt％，胰蛋白酶0.02-1.5wt％，杀菌剂0.2-0.68wt％，离子补充剂0.16-0.66wt％，离子螯合剂0.08-0.23wt％，稳定剂0.03-1.11wt％，其余为纯化水。

通过采取上述技术方案，纯化水作为细胞保存液的基体，氯化钠作为细胞保存液的渗透压调节剂，磷酸二氢钠和磷酸氢二钠作为细胞保存液的缓冲剂，无水乙醇作为细胞保存液的固定剂，同时柠檬酸钠作为细胞保存液的抗凝剂，满足细胞在细胞保存液中的基本存活条件；

同时本申请还加入了适宜量的胰蛋白酶，作为一种蛋白质水解酶，可以选择地水解蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，有效稀释口腔粘液，使得细胞可以充分释放到细胞保存液中；同时本申请还加入了离子补充剂和离子螯合剂，在补充钙离子的同时，对部分钙离子进行络合，规定含量的离子补充剂和离子螯合剂相互配合，可以有有效提高胰蛋白酶的活性稳定性，从而使得口腔细胞更好地分散在细胞保存液中。

杀菌剂和稳定剂则作为功能性添加剂，配合细胞保存液中的其他组分，使得口腔细胞很好地分散在细胞保存液中，使得口腔细胞长时间保持良好的丰度和完成性，提高细胞的存活率，使得细胞后继可用于酶切、PCR和二代测序等多种生物学实验；而且制备方法简单。