[发明专利]TREM-2在监测血吸虫病肝纤维化进程的方法及应用

说明书

本发明公开一种实验性动态监测血吸虫病肝纤维化发展过程的方法，其特征在于，采用动物模型动态监测TREM‑2在血吸虫病肝脏中的表达方法。本发明还公开TREM‑2在制备监测血吸虫病药物方面的应用。本发明另外还公开TREM‑2在制备治疗血吸虫病药物方面的应用。本发明的实验性动态监测血吸虫病肝纤维化发展过程的方法中通过检测感染血吸虫的不同时间时，检测TREM‑2在血吸虫病肝脏中的表达，从而监测肝纤维化发展过程，为监测肝纤维化发展过程，提供了新的靶点。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种TREM-2在监测血吸虫病肝纤维化进程的方法及应用。

背景技术

髓系细胞触发受体（triggering receptor expressed on myeloid cells,TREM）是一类隶属于免疫球蛋白超家族的细胞表面受体，主要包括TREM-1和TREM-2等，在炎症和免疫调节中发挥重要作用。研究表明，TREM-2与巨噬细胞的M2型极化存在较大的相关性。TREM-2具有使巨噬细胞从M1型向M2型极化的能力，并能够通过抑制巨噬细胞的凋亡从而导致慢性感染期M2型巨噬细胞的大量堆积，抑制T细胞增殖以及抑制炎症反应。血吸虫病动态发展过程中，巨噬细胞从M1逐渐向M2期转化，TREM-2在血吸虫病肝纤维化进程中的表达及应用未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种实验性动态监测血吸虫病肝纤维化发展过程的方法、TREM-2在制备监测血吸虫病药物方面的应用，作为一种新的稳定动态监测血吸虫病肝纤维化发展的方法或药物。

本发明的实施例提供一种实验性动态监测血吸虫病肝纤维化发展过程的方法，其特征在于，采用动物模型动态监测TREM-2在血吸虫病肝脏中的表达方法。

进一步的，一种实验性动态监测血吸虫病肝纤维化发展过程的方法，包括以下步骤：

（1）、建立小鼠动物模型

（1-1）动物分组：选取30只的8周龄雌性C57BL/6小鼠，饲养于12h昼夜循环，且湿度为55%的洁净空间内；随机选取6只小鼠作为健康对照组，其余分配为血吸虫病组；

（1-2）动物模型制备：剃除血吸虫病组的小鼠腹部毛暴露出皮肤，固定于小鼠架，从感染性钉螺中溢出日本血吸虫尾蚴，取血吸虫尾蚴挑取于盖玻片上，并紧贴小鼠腹部皮肤保持15min，使尾蚴充分进入小鼠皮肤感染小鼠；

（2）、RNA抽提

（2-1）针对步骤（1-2）所制备动物模型，分别取感染血吸虫后0周、3周、6周、9周小鼠肝脏组织，按 1ml/50-100mg组织加入 Trizol，置于匀浆器中，冰上研磨后转至EP管内；

（2-2）随后按照0.2ml/ml Trizol 加入氯仿，轻轻混匀后室温放置10min；

（2-3）4℃ 12000rpm 离心 15min；

（2-4）小心吸取上层水相0.5ml，按照1:1体积比加入异丙醇，轻轻混匀后室温放置10min；

（2-5）4℃ 12000rpm 离心 20min，去除上清；

（2-6）加入1ml预冷的75%乙醇，震荡混匀4℃ 12000rpm 离心5min；

（2-7）弃上清，静置干燥RNA，用DEPC水溶解沉淀；

（3）、RT-qPCR检测

（3-1）将步骤（2）获得的RNA用Thermo生产的REVERTAID 1ST CDNA SYNTH KIT逆转录为cDNA；

（3-2）获得的cDNA用TAKARA生成的TB Green™ Premix Ex Taq™ II 试剂盒进行实时定量PCR检测TREM-2的表达。