[发明专利]刺激Th1细胞增殖活化的肠道微生物的分离培养基及分离培养方法

权利要求书

1.一种刺激Th1细胞增殖活化的肠道微生物的分离培养基，其特征在于，包括以下原料：9g-19g琼脂、34g-36g脑心浸液培养基、4g-5.5g酵母提取物、0.3g-0.5g半胱氨酸盐酸盐、8g-10g胆汁盐、7g-13g葡萄糖、0.3g-0.6g柠檬酸铁铵、蒸馏水1000mL，盐酸0.1mL-1.2mL、0.02g-1.0g维生素K、0.1g-1.2g血红素、1mg-7mg庆大霉素、40mg-135mg卡那霉素、8mg-42mg新生霉素。

2.根据权利要求1所述的刺激Th1细胞增殖活化的肠道微生物的分离培养基，其特征在于，包括以下原料：15g琼脂、34g脑心浸液培养基、4.5g酵母提取物、0.4g半胱氨酸盐酸盐、9g胆汁盐、7g葡萄糖、0.5g柠檬酸铁铵、1000mL蒸馏水，0.1mL盐酸、0.09g维生素K、0.5g血红素、6mg庆大霉素、129mg卡那霉素、41mg新生霉素。

3.一种刺激Th1细胞增殖活化的肠道微生物的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)粪便中微生物的收集：无菌取机体直肠内容物于PBS溶液中，4500r/min-10000r/min离心3min-8min，弃掉上清，重复2次；

2)目标菌种的分离：使用25mL-60mL权利要求1所述的分离培养基重悬沉淀后，每孔1-2mL加入到24孔聚苯乙烯板中，在标准厌氧培养条件下培养4d-8d；

3)目标菌种的扩大培养：收集24孔聚苯乙烯板中的培养物进行培养，5000r/min离心3min，弃掉上清，取20mL-70mL权利要求1所述的分离培养基重悬沉淀，加入到24孔聚苯乙烯板中，在标准厌氧培养条件下再培养5d-8d；然后，将培养基更换为靶标菌扩增培养基，再培养3d-9d；

4)目标菌种的收集：收集24孔聚苯乙烯板中的培养物，8000r/min-14000r/min离心5min，弃上清，沉淀用1.8mL无菌水重悬，-80℃冰箱中冻存备用。