[发明专利]干扰非洲猪瘟病毒基因表达的siRNA及其应用

说明书

本发明公开了一种干扰非洲猪瘟病毒基因表达的siRNA，所述siRNA是下述双链RNA序列之一：1)正义链、反义链为SEQ ID NO:6‑7的双链RNA序列；2)正义链、反义链为SEQ ID NO:8‑9的双链RNA序列；3)正义链、反义链为SEQ ID NO:10‑11的双链RNA序列；4)正义链、反义链为SEQ ID NO:12‑13的双链RNA序列；5)正义链、反义链为SEQ ID NO:14‑15的双链RNA序列。本发明筛选出的siRNA序列分子，可以高效地沉默/抑制靶基因的生物表达。为预防和治疗非洲猪瘟病毒传染，快速研制抗病毒核酸药物提供了有效技术和手段。

技术领域

本发明涉及RNA干扰抗病毒领域，具体涉及一种干扰非洲猪瘟病毒基因表达的siRNA及其应用。

背景技术

非洲猪瘟首次于1921年的肯尼亚被发现，是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种在养殖猪中高度易感的烈性传染病，其致死率接近100％，目前尚没有任何疫苗和有效的抗病毒药物来预防或治疗这种疾病。非洲猪瘟在撒哈拉以南非洲地区流行多年，60年代在西欧大流行，在过去十多年中，它又在高加索，俄罗斯联邦和东欧的许多国家蔓延，特别是2018年非洲猪瘟疫情首次在中国被发现，2019年9月中国生猪产量较上年同期下降了40％左右，经济损失非常大，同时也对人民生活造成了很大影响。据世界动物卫生组织报道，在2018-2019年由于非洲猪瘟造成全球性的经济损失估计在140亿元左右。目前切断非洲猪瘟传染的途径只有隔离健康牲畜和扑杀感染牲畜的方法，并且病毒在自然环境中的存活能力很强，在猪群中传染性非常快，所以有效的治疗非洲猪瘟的手段是目前应对疫情的迫切需要。

非洲猪瘟病毒是一种大型复杂的双链DNA病毒，是已知的唯一一种虫媒DNA病毒，它的长度在170-193kbp左右，具有二十面体的多层结构。非洲猪瘟病毒编码超过160个蛋白，其中还有很多蛋白的生物功能未能明确，一部分基因编码蛋白作为生物抑制剂来调节宿主细胞的生物进程，进而影响到宿主免疫系统对病毒的免疫应答，这也是目前没有有效疫苗和药物来控制/治疗非洲猪瘟的重要因素。

本发明使用RNA干扰技术(RNAi技术)开发新一代siRNA核酸药物。RNA干扰技术是一种强大的手段，它可以用来抑制基因功能，比如通过破坏相应基因的mRNA，抑制基因的转录或者抑制mRNA转译成相应蛋白来实现。RNA干扰技术能够在基因层面将靶标蛋白清除，极大提高生物能源和资源的利用度，同时也极大减少了宿主体内正常生理活动所受的影响。

此技术通过将非洲猪瘟病毒在转录，复制和组装过程中涉及到的关键mRNA沉默并降解，使其失去原有的功能，从而导致病毒的完整生物过程被打断，来抑制病毒的增长并最终消除病毒。本发明干扰非洲猪瘟病毒基因表达的设计方案有下列两种：一是抑制病毒的高度保守的关键基因，比如DNA聚合酶编码基因，RNA聚合酶编码基因等等，直接将病毒的复制和转录过程破坏引起病毒凋亡；另一种是抑制病毒的一些特殊蛋白的编码基因，比如MGF505-7R基因，MGF360-15R基因，EP402R等等，这些特殊蛋白可以抑制迟缓宿主体内的免疫应答，或者引起高毒性和高传播性，从而使得病毒能够从宿主的免疫系统逃逸并导致高致死率，通过抑制这些蛋白基因，可以延缓病毒增殖，恢复宿主的免疫应答，使得病毒能够被宿主的自身免疫系统清除。非洲猪瘟病毒的基因序列已经明确，可以通过选择关键的基因序列片段来设计抗病毒的专有siRNA药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种干扰非洲猪瘟病毒基因表达的siRNA及其应用，以解决现有技术的不足。

本发明采用以下技术方案：

本发明第一方面提供了一种干扰非洲猪瘟病毒基因表达的siRNA，所述siRNA对应的靶序列为非洲猪瘟病毒MGF 505-7R基因、MGF 360-15R基因、EP402R基因、H359L基因或O174L基因序列上连续的19-25个核苷酸。